菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/26 02:54:40
菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
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菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
菌液直接PCR
我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多少,菌液体积应加多少,其他还要做什么修改,做出来和煮模板做区别大吗?

菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
其实你原体系中7微升都太多了.我做50微升体系最多加3微升模板.
菌液PCR只需要用枪头沾取菌落,或者加入2微升左右菌液即可.预变性时间可稍微延长.如果引物特异性好的话,和用DNA模板效果差不多.

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鉴定为目的的菌落PCR，我通常只用20μL体系，20μL体系就够了，不就是看个有没有嘛，多了浪费试剂。
20μL里面作为模版的菌液，我只加0.2~0.3μL（1%~1.5%，尽量减少对PCR体系的干扰，而且可以减小非特异性结合的发生）；如果是固体菌落，那更是微乎其微——事实上更少的体积都没问题，但是2.5μL的枪最小只能到0.2μL，0.1μL那是扯淡。
变性时间，如果...

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鉴定为目的的菌落PCR，我通常只用20μL体系，20μL体系就够了，不就是看个有没有嘛，多了浪费试剂。
20μL里面作为模版的菌液，我只加0.2~0.3μL（1%~1.5%，尽量减少对PCR体系的干扰，而且可以减小非特异性结合的发生）；如果是固体菌落，那更是微乎其微——事实上更少的体积都没问题，但是2.5μL的枪最小只能到0.2μL，0.1μL那是扯淡。
变性时间，如果按1%加的话，只需要95℃总共3分钟就绰绰有余了，也就是2.5min+第一个循环的0.5min
PS：
如果你用的是含Mg2+的培养基，那加多了菌液会把体系的Mg2+浓度提高，将替PCR的特异性。
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菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多 PCR 怎样稀释做50微升体系的PCR使用的引物浓度是多少?怎样稀释? pcr 25微升 体系的各种组分具体是怎么加的? pcr反应体系中引物浓度20uM指的是什么,还有20微升体系怎么换算成50微升体系呢, PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系我用的25微升的反应体系 请问我的电泳图跑成这样,是为什么?我的模板用的是第一次PCR的产物,体系总共是60微升,模板2微我的第一次PCR用的是质粒DNA 而且产物条带还行 一般PCR产物浓度能达到多少ng每微升我只测了一下纯化回收后的,才10+ng每微升,不知道是不是试剂盒回收效率太低我的片段500bp,PCR程序33个循环,50体系 mtDNA进行pcr扩增 25微升体系的电泳结果全部都出想要的一条亮带 但是做了50微升体系的之后跑电泳 许多不出条带 要不就是有拖带 这种情况是怎么回事 pcr技术的反应体系? PCR反应体系中dNTP的浓度怎么算?我的反应总体积20微升,其中加1.0微升dNTP,装有dNTP管上写的10mM,1mL. 如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不 PCR扩增时,25微升体系一般加引物多少? 25微升PCR体系中,两种引物分别加0.5微升,那么所添加的引物的浓度是多少?几摩尔每升?不问终浓度,问的是加入体系之前那0.5微升的引物其浓度几何? PCR反应体系的主要成分包括什么? 请教高手关于移液枪的使用现在跑PCR,25微升体系,有两把枪,一把20ul的,一把100ul的,先把体系混合好了再分装入每个PCR管,最后加酶.现在有个问题是,是用20ul的枪调成25ul去加样,还是用100ul的枪调 为什么PCR仪上要设PCR反应体系大小,如果20ul的体系在PCR仪上用50ul来跑,会有什么结果 2%琼脂糖凝胶电泳检测/分离DNA时凝胶的厚度DNA上样量50微升,凝胶的厚度应为多少?样品为PCR扩增产物,目的是要回收,做二次PCR 【跪求】我的PCR体系应该怎么设定?退火温度?我做一种真菌的pcr,引物序列左：aatcgacccgtttccgcctt, 右：gttagattgaccgcgattcc,生工合成单给的退火温度分别是59.85和57.8我的25微升体