pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/25 23:31:03
pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
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pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?

pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
大肠杆菌DH5α一般做克隆或保存质粒用,BL21用来做原核表达用.BL21(DE3) 菌株用于高效表达含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因,表达效率高.T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上.DH5α可以表达抗性基因,应该也能表达外源基因,但是我们一般不用该菌作为表达菌,可能与表达量、表达产物活性有关.毕竟体外表达活的的产物是为了继续做下面的工作,没有表达量,后面什么工作都无从谈起了

pET系列载体都用来自于λ 噬菌体的T7启动子，该启动子转录需要用到T7 RNA聚合酶。而野生的大肠杆菌（比方说DH5α或BL21）体内没有该酶的基因，所以无法启动该启动子后面基因的表达。BL21（DE3）菌株是在野生型BL21菌株的基础上，整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段，该片段中包含了编码T7RNA聚合酶的基因，能够在IPTG或乳糖诱导下表达T7RNA聚合酶，而该聚合酶又能进一步转录T7...

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pET系列载体都用来自于λ 噬菌体的T7启动子，该启动子转录需要用到T7 RNA聚合酶。而野生的大肠杆菌（比方说DH5α或BL21）体内没有该酶的基因，所以无法启动该启动子后面基因的表达。BL21（DE3）菌株是在野生型BL21菌株的基础上，整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段，该片段中包含了编码T7RNA聚合酶的基因，能够在IPTG或乳糖诱导下表达T7RNA聚合酶，而该聚合酶又能进一步转录T7启动子，从而启动载体上外源基因的表达。因此说，理论上只要整合了DE3片段的大肠杆菌（比如BL21（DE3）或JM109（DE3）等）都能用作pET系列载体的表达。

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pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达? BL21中的表达载体为什么要用IPTG诱导 在基因工程研究和应用中,为什么必须使用载体来克隆外源DNA片断? 表达型大肠杆菌BL21（DE3）PLySs感受态细胞转化培养BL21（DE3）PLySs感受态细胞在转化培养时,如果用SOC培养基,需要另外加氯霉素吗?如果选用BL21（DE3）感受态细胞对于PE28+载体转化表达来说,有没 谁说说质粒载体pet 22b的一些特点以及它作为质粒载体在DNA克隆中的优势? 在基因工程研究和应用中,为什么必须使用载体来克隆外源DNA片段?详细一点 基因表达载体必须在细胞内进行吗? 关于表达质粒转化BL21(DE3)的问题用表达空载体pET28a和重组表达质粒pET4c9转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在含有卡那霉素的琼脂平板上选择培养,挑取pET28a和pET4c9转化菌落,请教各位大侠,如果挑取? PET-22B原核表达载体的信号肽可以被切除吗?在用PET-22B表达真核蛋白,其信号肽可以被切除吗? 为什么BL-21适合蛋白质表达?还有携带目的基因的质粒在BL-21中的蛋白质表达是怎样的?目的基因为p50基因,载体为pET-21b(+)质粒 PET-41a载体表达出来的蛋白是可溶性的活性蛋白吗?一段基因进行原核表达,必须有活性,怎么选载体, 转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而 目的基因连入表达载体后用不用先转入DH5a扩增、酶切鉴定然后再转入BL21? pet载体原核表达基因的终止密码子要加吗 为什么要做pet 为什么要做PET 原核基因在大肠中表达存在密码子偏爱性吗?我在做芽孢杆菌一个蛋白的异源表达,基因克隆了,用的pET-28a,表达菌株是BL21(DE3)pLysS,测序也没有问题,25℃、30℃、37℃都诱导了,IPTG为0.5mM.可就是不 为什么用IPTG诱导蛋白没表达?双酶切及PCR验证目的片段连到表达载体pET28a上了(所用的内切酶是BamH1,Hind111).重组质粒转化BL21,试了不同的IPTG浓度,诱导温度,就是没蛋白表达.后来重组质粒转化JM10