作业帮高效液相色谱法分离某物质得到的色谱图两个峰值相同,是什么原因?应该采用哪些具体措施改善其分离呢?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/20 15:28:54
高效液相色谱法分离某物质得到的色谱图两个峰值相同,是什么原因?应该采用哪些具体措施改善其分离呢?
高效液相色谱法分离某物质得到的色谱图两个峰值相同,是什么原因?应该采用哪些具体措施改善其分离呢?
高效液相色谱法分离某物质得到的色谱图两个峰值相同,是什么原因?应该采用哪些具体措施改善其分离呢?
从简单到复杂,可行性从高到低的方法如下
1：换方法,通过检索相关文献找到更合适的分析方法.
2：换柱子,更换性能更好的色谱柱以改善分离度【旧柱子换成新柱子,短柱子换成长柱子,用高效分离柱（粒径更小,孔径更细的柱子）或者根据两个化合物的性质换特殊柱子（例如换含碳量更高或更低的柱子或者换经过特殊处理的柱子）】
3：将等度洗脱改成梯度洗脱
4：改变柱温（这个需要自己摸索一下）
5：改变流动相中各组分的比例,例如
5.1：改变流动相的PH值（分离酸性物质则调低流动相的PH值,分离碱性物质则调高PH值）
5.2：改变各流动相组分或比例,例如将反相色谱中的甲醇换为已经,或者增加水相的比例.
5.3：改变流动相的缓冲体系或改变流动相缓冲盐的离子浓度.（例如醋酸盐改磷酸盐.分离极性较大的物质则增大缓冲体系的离子浓度等）
以上各方法并不是每个都管用.当然最管用的还是方法1-3,方法4和方法5一般不常用.因为需要摸索,很麻烦.实在没办法或者为了省钱或者自己有兴趣,可以摸索一下.
这是我做HPLC多年的经验总结啊,
忘了说原因了：
1：这两个物质的性质非常相似,导致很难分离
2：你的系统（包含色谱柱和方法）并不适合分离这两个物质.
先看看峰宽，出峰很快的峰宽一定会很窄，反之最有可能的是你的柱子坏了或者填料不合适。
确定柱子没问题的话，可能是两个物质没分开（峰高相同的两物质没分开有点巧合了。。可能性不大），可以调整有机相和水相的比例。
还是不行的话再尝试更换水相的盐种类或者PH ，但是一般用到的可能性不大，PH主要是用于解决多组分分离度的问题。...
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先看看峰宽，出峰很快的峰宽一定会很窄，反之最有可能的是你的柱子坏了或者填料不合适。
确定柱子没问题的话，可能是两个物质没分开（峰高相同的两物质没分开有点巧合了。。可能性不大），可以调整有机相和水相的比例。
还是不行的话再尝试更换水相的盐种类或者PH ，但是一般用到的可能性不大，PH主要是用于解决多组分分离度的问题。
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从图上看，你这两个物质显然没有被分开。不过，能分成这样，以我看，这两个物质通过色谱条件的调整还是完全有希望分开的。如果你是用短柱子，建议用长柱试试看，如果柱子已经是25cm或者30cm的了，改变一下流动性比例，应该是可以分开的。另外，建议你可以参照一个叫drylab的色谱优化软件优化你的色谱条件...
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从图上看，你这两个物质显然没有被分开。不过，能分成这样，以我看，这两个物质通过色谱条件的调整还是完全有希望分开的。如果你是用短柱子，建议用长柱试试看，如果柱子已经是25cm或者30cm的了，改变一下流动性比例，应该是可以分开的。另外，建议你可以参照一个叫drylab的色谱优化软件优化你的色谱条件
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