请问心肌成纤维细胞怎样培养?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/14 19:02:37
请问心肌成纤维细胞怎样培养?
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请问心肌成纤维细胞怎样培养?
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博凌科为生物科技-为你用Langendorff灌流消化（胶原酶II）只能取得心肌细胞.建议直接将心脏剪碎,成纤维细胞我们这里一般采用0.05％胰酶消化.无菌条件 取出心脏D-hank's液（PBS也可）漂洗,剪碎心脏加入5倍体积消化液,37C水浴3－5min,反复吹打,静置,待自然沉降后弃去上清液.剩余沉 淀再加入约5倍体积0.08%胰蛋白酶及0.1%胶原酶II混合液,反复吹打,大约10分钟（消化时间往往靠经验的判断）,离心取沉淀重悬于含 20％BSA的DMEM（有条件可以用Cascade的培养液）.60－90min后更换培养液（差速贴壁,成纤维细胞比心肌细胞贴壁快）.1、胰酶的作用比较强烈,联合使用胶原酶将胶原纤维充分消化后利于离心时细胞沉淀,提高细胞存活率.另外,消化时间不宜太长,主要凭观察和经验来判 断.离心采用1000rpm 5min.2、酶的配置可以用d-Hank's液或生理盐水都行.血清的作用主要是终止消化,用一般加了血清的DMEM就行,我们这里是20％胎牛血清.3、贴壁时间：我师兄曾经告诉我2hr,现在我觉得90min已经很好了.4、细胞可以先用台盼蓝测定存活率.5、鉴定：在倒置显微镜下观察,细胞呈梭形、多角形,细胞质透明,细胞核大,呈椭圆形,常含有2－3 个核.IHC可以用I抗体（动物抗人B3、抗波形蛋白、抗血管平滑肌肌动蛋白）其余基本按IHC的步骤来.

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