作业帮急,如何构建原核表达载体
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/20 01:53:32
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急,如何构建原核表达载体
急,如何构建原核表达载体
急,如何构建原核表达载体
大体分为一下几步：
1.设计目的片段引物（含限制性酶切位点,要求：表达载体上有而目的片段上没有的酶切位点）
2.PCR扩增片段
3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接,通过蓝白斑筛选,提质粒并酶切鉴定；将正确连接的克隆载体重组质粒酶切,回收目的片段
4.目的片段与表达载体连接
5.转化到DH5a等克隆菌株,通过抗生素筛选,鉴定表达重组质粒.
6.测序检测
7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株
8.表达
就把重组基因导入到原核细胞dna里