请教半定量pcr的原理及介绍

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/17 17:17:26
请教半定量pcr的原理及介绍
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请教半定量pcr的原理及介绍
请教半定量pcr的原理及介绍

请教半定量pcr的原理及介绍
RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起,提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法.RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量.另外,这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA.RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术,更灵敏,更易于操作.
RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA.逆转录反应可以使用逆转录酶,以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始.RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行.在两步法RT-PCR中,每一步都在最佳条件下进行.cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行,然后取出1/10的反应产物进行PCR.在一步法RT-PCR中,逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下,在一只管中顺次进行.
实验步骤：
Trizol法RNA提取步骤
1、提取总RNA
2、逆转录反应
3、PCR反应

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