测序结果分析,以及RACE引物设计.求助呢我的是用简并引物扩增的未知基因的高度保守区.现在已经拿到测序结果.我首先找到了上下游引物的位置,然后把质粒DNA截掉.拿高度保守区BLAST结果出现

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/12/01 04:14:50
测序结果分析,以及RACE引物设计.求助呢我的是用简并引物扩增的未知基因的高度保守区.现在已经拿到测序结果.我首先找到了上下游引物的位置,然后把质粒DNA截掉.拿高度保守区BLAST结果出现
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测序结果分析,以及RACE引物设计.求助呢
我的是用简并引物扩增的未知基因的高度保守区.现在已经拿到测序结果.我首先找到了上下游引物的位置,然后把质粒DNA截掉.拿高度保守区BLAST结果出现各种不同物种的的该基因,其中与模式生物的该基因100%相似.abi图谱看起来也比较靠谱.我还要做什么呢?是不是可以直接用该基因设计引物准备做RACE扩增全长了?请设计过RACE3‘和5’端特异性引物帮忙指点一下.
另外我想说,我是一个小白,之前没什么实验基础.到现在拿到了保守区.从零基础一路以来,老师也没时间指导,都是靠自己在论坛里面提问.感谢那些帮助我的朋友.让我的实验如此的顺利.基本所有实验都一次性成功.一切尽在掌握中.谢谢

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先对实验对象进行诱导使你要的目的基因保证表达,然后提取总RNA,设计RACE特异性引物,5'RACE的特异性引物根据保守区靠近5‘端设计下游引物记得设计两条下游引物（模版序列的反向互补）,一条比另一条更靠近保守区的上游,这两条最好相距几个碱基,还要保证和RACE上游引物的TM值相近.先用总RNA为模板使用5‘RACE试剂盒处理RNA5’帽子随后进行反转录,然后利用RACE上游引物和你设计的靠保守区下游的下游引物进行第一轮PCR.产物作为模版以RACE上游引物和你设计的靠保守区上游的下游引物进行第二轮PCR,以第二轮PCR产物进行克隆测序.
3‘RACE的特异性引物根据保守区靠近3’端设计上游引物1条（照抄模版序列）要保证和RACE下游引物的TM接近,利用3'RACE试剂盒反转录总RNA,然后使用你设计的上游引物和RACE下游引物中的Outer进行第一轮PCR,产物作为模版以你设计的上游引物和RACE下游引物中的Inner进行第二轮PCR,以第二轮PCR产物进行克隆测序.
两轮PCR即巢式PCR,目的是更有效的避免非特异扩增,因为你模版用的是总RNA

测序结果分析,以及RACE引物设计.求助呢我的是用简并引物扩增的未知基因的高度保守区.现在已经拿到测序结果.我首先找到了上下游引物的位置,然后把质粒DNA截掉.拿高度保守区BLAST结果出现 【求助】测序结果找不到上下游引物,怎么回事啊? 如何设计3‘和5’RACE的引物? 那个RACE设计引物具体怎么做的?求指教 如何设计3‘和5’RACE的引物? 反向测序引物怎么设计? 如何用ncbi设计引物以及验证引物 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加 引物测序结果怎么看 如何将氨基酸序列转化为核苷酸序列我想根据氨基酸测序结果设计引物扩增编码序列 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物 【求助】请教：加HIS标签的引物如何设计 请教长片段DNA如何设计测序引物? 引物设计 测序 PCR 探针测序,PCR,探针引物设计的不同?分别要注意哪些问题? 克隆测序结果找不到目的片段的引物序列 请问拿到测序的结果,怎么找不到引物序列? 请问拿到测序的结果,怎么找不到引物序列?