如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/14 09:38:55
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如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
1 选择载体标准:采用能够在真哺乳动物细胞中能够正常转录的,由启动子、加PolyA 信号,转录终止和可能的内含子、增强子等组成的表达盒的载体,通常还有真核复制起始区,如SV40 ori.
2 转染:化学法如磷酸钙共沉淀,脂质体,或者物理的电穿孔法,都有现成的试剂或者仪器可进行
3 检测:可以用载体上所带抗生素,或者测定目的基因表达:转录产物:real time PCR,翻译产物:western blot
楼主,表达载体的选择标准肯定是要能在动物细胞中进行正常表达,例如细胞中的RNA聚合酶必须要能识别表达载体上的启动子,一般不使用哺乳动物的细胞,多采用细菌。表达载体转入宿主细胞的方法,仍然是先把宿主细胞制备为感受态,然后直接转化。检测的话最可靠的是对目的基因进行诱导表达,对表达产物做一个western杂交,当然这一步要求你表达的蛋白质要有相应的抗体。...
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楼主,表达载体的选择标准肯定是要能在动物细胞中进行正常表达,例如细胞中的RNA聚合酶必须要能识别表达载体上的启动子,一般不使用哺乳动物的细胞,多采用细菌。表达载体转入宿主细胞的方法,仍然是先把宿主细胞制备为感受态,然后直接转化。检测的话最可靠的是对目的基因进行诱导表达,对表达产物做一个western杂交,当然这一步要求你表达的蛋白质要有相应的抗体。
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