western-blot中分离胶的浓度怎么选择?比方10%的分离胶对26kd的好呢,还是15%分离胶的好分些?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 05:56:55
western-blot中分离胶的浓度怎么选择?比方10%的分离胶对26kd的好呢,还是15%分离胶的好分些?
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western-blot中分离胶的浓度怎么选择?比方10%的分离胶对26kd的好呢,还是15%分离胶的好分些?
如果以溴酚蓝跑到胶的底部为准,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大约1/2（不太确定）的地方,对于分子量比较小的蛋白,当然是胶的浓度越大,分离效果越好.但是你必须考虑到,胶的孔径一旦小于蛋白-SDS复合体的直径,分子量大于这个蛋白的所有蛋白仍然不能有好的分离效果.如果孔径太大,所有蛋白都跑得那么快,也是分不开的.
所以,关键是看这个分子量附近的蛋白,比如±5kD以内的所有蛋白,在不同浓度的胶中的速度差要尽可能达到最大,假设是对数正态分布,那么方差要足够大,才会有较好的分离效果.另一方面,蛋白跑的路程越大,也越能和附近的蛋白分开.
我的建议是溴酚蓝跑到底,而目标蛋白正好在整块胶的1/2的地方,分离的效果时最好的

看你的蛋白分子量，小的用高浓度，大的用低浓度，目的都是为了跟相近蛋白分开。26KD用12%-15%都可以

简单的告诉你一下吧，跑50kDa以上的蛋白要用10%的。50kDa-15kDa左右的话用15%的，跑更小的蛋白（比如10左右或以下的），就要适当的把胶的浓度再提高，18%或20%都可以。

26KD，10%的就可以。小于20KD要用0.22uM的膜。

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