如何提取小鼠骨髓细胞?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/17 09:50:17
如何提取小鼠骨髓细胞?
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如何提取小鼠骨髓细胞?
如何提取小鼠骨髓细胞?

如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分钟后,拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上.
2、无菌提取小鼠的四肢骨,用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开皮肤,并分离两下肢的皮肤,往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,这样可以游离出小鼠的两条下肢.
3、小心剥离肌肉,分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔.注意尽可能少的剪走骨髓腔.用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净.
4、拿一支1ml的无菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯.轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓,一般用2-3ml培养基冲洗两次,可冲出绝大部分细胞.
5、过滤：用2OO目的滤网过滤,将滤网的中央插入到离心管里面25px处,然后用注射器吸取骨髓液,慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中,去除残渣.
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清,加入1ml红细胞裂解液ACK,静置3分钟,再加9ml HBSS溶液,进行离心10分钟,弃上清.
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次,室温,1350r/min离心10分钟.计数活细胞,用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基,然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇,
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀,24孔板铺板培养,每个孔1ml.

钢针提取。

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