作业帮DNA合成仪的原理是什么
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/27 05:35:41
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DNA合成仪的原理是什么
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DNA的固相合成.
即DNA3'端固定于基质上,然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段.不同于应用DNA聚合酶的DNA合成.
第一个碱基的3‘末端固定在树脂上,下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用苯甲酸保护,然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化.
1.1个碱基的5’-OH和下个碱基的3‘-OH形成亚磷酸三酯,
2.然后用碘氧化成磷酸三酯
3.加入二氯乙酸除去第二个碱基5’-OH上的保护剂DMT
循环进行加入下一个碱基
合成完毕后
1.用苯硫酚除去5’-OH上的保护剂DMT
2.用浓氢氧化铵将片段与固体树脂断开,洗脱
3.用浓氢氧化铵在加热的条件下除去碱基上的保护剂
4.除去氢氧化铵,真空抽干
5.液相色谱或者PAGE,回收片段最长的.
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