鸡胚成纤维细胞培养实验的步骤我想要的是实验过程中的步骤，加什么试剂，做什么样的处理

鸡胚成纤维细胞培养实验的步骤我想要的是实验过程中的步骤，加什么试剂，做什么样的处理
鸡胚成纤维细胞培养实验的步骤
我想要的是实验过程中的步骤，加什么试剂，做什么样的处理

鸡胚成纤维细胞培养实验的步骤我想要的是实验过程中的步骤，加什么试剂，做什么样的处理
成纤维细胞一般都很好养的.注意灭菌和观察培养液颜色变化,及时更换.检查培养箱有没有受到污染.最好自己灭菌比较放心.
强烈推荐来这下载,很不错的一篇肝细胞应用分析论文：
可 实 验 发现,从STO饲养层培养的ICM 细胞
分离的胚胎干细胞嵌合力、存活率均低于PMEF,
且核型异常的ES细胞的比率比PMEF的高.不同
动物的胚胎对饲养层的选择不同,羊全胚或分离的
1CM在STO上不扩展,在同源胚胎成纤维细胞上
能扩展,但未得到ES细胞.猪全胚或分离的ICM
只有在STO或STO+BRL(大鼠肝细胞饲养层)一
CM 上能附着增殖,并迁移到饲养层上形成类ES细
胞.山羊和绵羊的类ES细胞只能用BFLF(胎牛肝
成纤维细胞)分离得到.鸡的PGCs培养在STO饲
养层和LEFs鸡胚成纤维细胞)上,7^-10 d就可传
代一次.
3.2 早期胚胎及基本培养基的选择和外源性物质
的添加
以下 的 早 期胚胎都可作为建立ES细胞系的材
料:牛的桑棋胚(6-7日龄),囊胚(7^-8日龄);山羊
的囊胚(7^-8日龄);绵羊的囊胚(7^-9日龄);猪的
囊胚(7^10日龄);兔的囊胚(4^-5日龄)等.而对
PGCS来说,牛取29^-35 d胚胎生殖蜻,猪取23-
25 d胚胎生殖岭等.
ES 的 基 本培养基一般采用】〕MEM,因为它比
较适用于生长速度快、呈集落生长而又贴壁性差的
细胞.由于DMEM的各种成分不一定能保证ES细
胞处于最佳生长状态,因此还需添加一定的外源性
物质,如p-琉基乙醇、硒酸钠、非必需氨基酸和生长
因子等物质.p一琉基乙醇可促进胚胎细胞的分裂增
殖,并促进DNA的合成,防止过氧化物对培养细胞
的损害,促进胚胎贴壁.硒酸钠是一种附加的营养成
分,是细胞生长所必需的.1993年Sims等在培养牛
的ES细胞过程中加人硒酸钠后提高了传代过程中畜禽胚胎千细胞的应用价值及前景分析
199 9 年 ,美国《科学》杂志将ES细胞研究成果
评为该年度世界十大科技进展之首,可见人们已预
见到干细胞尤其是ES细胞在医学乃至整个生命科
学中的巨大发展潜力.
4.1 ES细胞是细胞分化和发育生物学研究的重要
材朴
利用 ES 细胞的多潜能性,能诱导ES细胞发生
定向分化.类视素(又称维生素A酸)能诱导ES细
胞分化成体壁内胚层,NGF(神经生长因子)又能使
之分化成神经细胞,而LIF,DIA等细胞因子却能使
之保持未分化状态,或分化成中胚层.而细胞分化又
是发育生物的重要课题,因此诱导分化必将为发育
生物学中细胞分化的决定作用以及恶性肿瘤的深人
研究提供新的材料和思路.而且如果用胚胎干细胞
进行实验.就可以避开许多障碍,直接观察细胞的分
化、发育的荃因调控,推动理论科学的发展.

成纤维细胞一般都很好养的。注意灭菌和观察培养液颜色变化，及时更换。检查培养箱有没有受到污染。最好自己灭菌比较放心。

这个本人正好有收藏，希望有所帮助
鸡胚绒毛尿囊膜血管形成(CAM)试验方法 1)．鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵(新洁尔灭)液浸泡3分钟，置37．8土0．5℃培养箱中孵育。鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再剪成1～2mm组织小块。
(2)组织接种：...

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这个本人正好有收藏，希望有所帮助
鸡胚绒毛尿囊膜血管形成(CAM)试验方法 1)．鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵(新洁尔灭)液浸泡3分钟，置37．8土0．5℃培养箱中孵育。鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再剪成1～2mm组织小块。
(2)组织接种：在制备鸡胚观察窗的次日，即鸡胚发育第8天进行组织接种。每个鸡胚可接种5—7个组织小块于接种部位CAM表面，再用透明胶纸封好，继续孵育。
(3)接种组织的收获与观察：组织接种后每12小时观察一次，到组织接种第11天(鸡胚发育第18天)收获接种组织，取出鸡胚，置接种组织连同周围的CAM于解剖显微镜下观察，并用10％甲醛固定保存，部分组织可作石蜡切片，用作血管生成研究的免疫组化染色等。
(4)CAM的血管生成表现：组织接种24小时后，CAM血管开始向接种组织生长，随培养时间的延长，血管数目及直径均明显增加；第2天，新细小血管直接趋向组织；第3天，新生血管形成以接种组织为中心，10～20条放射状血管网；尔后，CAM血管继续明显增加。非接种部位与接种部位比较，CAM血管数目少，大血管与小血管呈脉样均匀分布；而接种部位的CAM血管在接种组织周围弥散样增加，以组织为中心向周围呈放射状分布，在首先与组织发生联系的区域CAM血管更多。第4天，可见新生细小CAM血管生长形成中、粗血管，并在中、粗血管继续分支出细小血管，形成新的血管网。CAM血管管腔结构清晰，可区别动、静脉。
(5)CAM血管生成实验模型的用途：CAM血管生成模型用于血管生成的研究，可取得两方面结果：①检测评价接种物刺激CAM血管增生的血管生成作用，用于分析研究血管生成促进因子、抑制因子的活性和作用的检测，如肿瘤血管生成的研究等；②对接种物，如肿瘤组织、自身的血管生成进行研究，用于分析不同组织的血管生成活性和作用，如肿瘤组织有引发新生血管生成的作用，但肺癌与其他癌组织的血管生成活性和作用可能不同。
尽管血管生成的体内动物模型研究更为接近人体的生理状态，使研究结果更为可靠，但仍有一些不足之处，如操作繁琐，耗时过长；另外，在该类模型中，血管生成物必须植入眼角膜囊、颊囊、或绒毛尿膜囊使之诱导血管生成，难免产生人为因素诱导的血管生成；血管生成促进因子、抑制因子等需要从多聚载体中释放出来；操作方法和测定其结果的技术较为复杂
鸡胚卵用o．1％新洁尔灭消毒，在37．6℃(上下浮动 o．2℃），60％湿度的隔水式恒温孵箱内孵育c每日翻动2次，孵育第7天时(满24h为1天)，在绒毛尿囊膜体表投影距胚头1cm处上划定开窗位置。无菌条件下，磨切暴露绒毛尿囊膜，制出假气室。透明胶带封闭窗口。鸡胚开窗后24h，甲基纤维素盘放人假气室(避开大血管)，对照组盘中加入 20微升灭菌PBS，实验组盘中各加入待测物20微升，透明胶带封闭假气室，继续孵育。每日加样一次，第十二天取材。假气室注入丙酮甲醇混合液固定20分钟后，取假气室一侧的蛋壳后固定20分钟，剥离CAM膜．铺在滤纸上，阴干保存。

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