RT-PCR怎么都没法克隆出目的片段我用的上下游引物tm值相差较大,解决办法是先用低的退火温度跑5个循环,然后再用高退火温度的跑25个循环.试剂盒使用的是takara 一步法RT-PCR KIT请问各位针对这

RT-PCR怎么都没法克隆出目的片段我用的上下游引物tm值相差较大,解决办法是先用低的退火温度跑5个循环,然后再用高退火温度的跑25个循环.试剂盒使用的是takara 一步法RT-PCR KIT请问各位针对这 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 我的目的片段连T载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR能P出目的片段,再提质粒用Ecor1做酶切,片段变小怎么回 DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 PCR杂带太亮怎么回收目的片段 从克隆载体上PCR出目的基因原理 已知一基因两侧序列,如何将该基因克隆你没明白我的意思，是要从如何获得目的基因上来回答；比如，知道一段蛋白质的mRNA序列，就用RT-PCR制备出cDNA，从而克隆。现在是知道两侧序列…… 我的taq酶进行梯度pcr为什么没有结果?引物和模板都没有问题,用la TAQ都能p出来目的片段由于要进行菌落pcr,la taq太贵了,所以需要使用普通taq进行.同一批次的引物在两个月之前还可以p出目的片 通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片 pcr扩出目的片段及引物二聚体,pcr反应能扩出我的目的片段,但同时最下面也能看到严重的引物二聚体,这是怎么回事?是引物量加多了吗?结果可靠不 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 大侠们,我现在做PCR,用的是师姐设计的引物序列,怎么才能知道目的基因片段的大小 PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增 大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 大家好,问一个不能等到台面上的问题：目的基因片段是扩增片段吗?什么是RT-PCR的目的基因片段,谢谢 PCR克隆出来的基因怎么确定是我想要的假设我知道,人的某段基因和老鼠的某段基因很相似,我用PCR的方式来克隆人的这段基因,因为我事先已经知道了老鼠的这段基因的序列,所以我可以设计出