作业帮PCR产物的酶切问题我用的PCR-RFLP法分析SNP：我的PCR产物有条带,可是我做酶切之后还是那条PCR产物的条带做了好几板都这样.病例和对照全做了,最后都没有切开的条带,这是怎么回事?十分感激.
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/26 03:37:21
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PCR产物的酶切问题我用的PCR-RFLP法分析SNP：我的PCR产物有条带,可是我做酶切之后还是那条PCR产物的条带做了好几板都这样.病例和对照全做了,最后都没有切开的条带,这是怎么回事?十分感激.
PCR产物的酶切问题
我用的PCR-RFLP法分析SNP：我的PCR产物有条带,可是我做酶切之后还是那条PCR产物的条带做了好几板都这样.病例和对照全做了,最后都没有切开的条带,这是怎么回事?十分感激.
PCR产物的酶切问题我用的PCR-RFLP法分析SNP：我的PCR产物有条带,可是我做酶切之后还是那条PCR产物的条带做了好几板都这样.病例和对照全做了,最后都没有切开的条带,这是怎么回事?十分感激.
PCR-RFLP技术我曾经做过,说实话这并不是一个稳定有效的鉴定方法,当时我也遇到和你一样的问题.
有这样的情况,一种是你选择酶的时候选择错误,在你该段基因上根本不存在这个酶切位点.
二是你根据别人发表序列确定了存在该酶切位点,但是因为基因突变等情况,导致你的病例酶切位点发生变化.
三是即使你病例存在了酶切位点,因为酶切体系的不合适,比如底物浓度过高,酶失活等,使得酶切失败.
你做了酶切的阳性对照没有，说不定你的酶切体系不对或者酶过期了。如果还不行，建议你回收PCR产物测序，看酶切位点是否突变了。
肯定是没有切点
应该先弄清楚序列看看到底有没有切点
如果序列比较少，有没有切点，用眼瞅一下就可以了
如果序列比较多，可以用酶切位点分析工具
http://www.yelinsky.com/blog/archives/278.html
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PCR产物酶切的问题我做的是PCR-RFLP法分析SNP：引物是参照文献设计,takara合成的.订购的是takara的Taq酶.PCR 条件也是文献中的,1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp.用文献报道的Msp I文字1μL,PCR产物
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