应如何干燥维生素c样品

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应如何干燥维生素c样品
实验十三 食物中维生素C的提取和含量测定

（2,4－二硝基苯肼法）
【实验目的】
1．熟悉维生素C的生理功能.
2．掌握食物中维生素C的提取和含量测定.
【实验原理】
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,是具有L-糖构型的不饱和多羟化合物,属于水溶性维生素.维生素C缺乏时会产生坏血病,因此,又称为抗坏血酸.维生素C分布很广,植物的绿色部分及许多水果(橘类、草莓、山楂、辣椒等)的含量更为丰富.
维生素C具有很强的还原性.易被氧化成脱氢维生素C.脱氢维生素C仍保留维生素C的生物活性,在动物组织内被谷胱甘肽等还原成维生素C.在pH>7.5时,脱氢维生素C易将其分子构造重新排列,使其内酯环裂开,生成没有活性的二酮古洛糖酸.维生素C、脱氢维生素C和二酮古洛糖酸合称为总维生素C.
食物中的总维生素C包括还原型和脱氢型两种形式.食物陈旧,贮存日久以及经过烹调处理的食物,其中有相当一部分维生素C成为脱氢型,此种形态的维生素C仍有85%左右的维生素C活性,所以对这类食物常常测定总维生素C.测定时须将样品中的还原型维生素C氧化成脱氢型维生素C.因脱氢维生素C和二酮古洛糖酸都能与2,4-二硝基苯肼作用生成红色的脎,脎的生成量与总维生素量成正比.于是将脎溶于硫酸,再与同样处理的维生素C标准液比色,可求出样品中的总维生素C的含量.
【器材和试剂】
1. 器材
硏钵、恒温水浴、72型分光光度计、50m1容量瓶、刻度吸管、100m1锥形瓶.
2. 试剂
（1）橘皮.
（2）9N硫酸：25m1浓硫酸 (比重1.84) 缓慢加入700m1蒸馏水中,冷却后稀释至1000mI.
（3）2% 2,4-二硝基苯肼：溶解2g 2,4-二硝基苯肼于100ml
4.5mol/L（9N）硫酸中,过滤.4℃保存.每次用前需再过滤,保存时间限于2周.
（4）85%硫酸：90m1浓硫酸(比重1.84)缓慢加入100mI水中.
（5）1%草酸溶液.
（6）10%硫脲：称取硫脲50g溶于1%500mI草酸中,4℃保存.保存期限2个月.
（7）活性碳:100g活性碳加入750ml
1mol/L(1N)盐酸回流1～2h,过滤,用蒸馏水反复洗涤活性碳至洗涤滤液中无Fe3+为止.然后置烤箱中110℃烘干冷却后置干燥器中备用.
（8）标准维生素C贮存液：精确称取维生素C100mg,以1％草酸溶解并定容至100m1,4℃保存.
（9）标准维生素C应用液：准确吸取标准维生素C贮存液1.0m1置100m1容量瓶中,用1%草酸溶液稀释至刻度,用时现配.
【操作步骤】
1．样品提取 橘皮2g剪碎置硏钵中,按1%草酸10～15 m1,硏磨5～10min,将提取液收集至50
m1容量瓶中,如此重复提取2～3次,最后加1%草酸至50 m1.
2．氧化、脱色
取上述提取液约10m1置于干燥100m1锥形瓶中,加入活性碳0.5g,充分振摇1min后过滤,取约10m1标准液于另一干燥锥形瓶中,加入活性碳0.5g
,同法振摇、过滤.
3．显色：取试管3支,编号,按下表操作：
试剂 空白 标准 测定
样品滤液（ml） 2.5 — 2.5
标准滤液（ml） — 2.5 —
10%硫脲（ml） 1 1 1
2%2,4—二硝基苯肼(ml) 0 1.0 1.0
混匀,置沸水浴中保温10min取出,流水冷却,空白管加2% 2,4—二硝基苯肼1ml.
4．脎的溶解
各管置冷水浴中缓慢加入85%硫酸3.0m1,边加边摇边冷却.加完后混匀,取出试管,室温下放置10min,于500nm波长下进行比色,以空白管凋零,测吸光度值.
【计算】
【附注】
（1）生蔬菜、水果捣匀浆时可能产生泡沫,为定容准确可加数滴戊醇以除去泡沫.
（2）处理活性炭时Fe3+检查法：取活性炭洗涤滤液少许,加数滴5%亚铁氯化钾,若不出现蓝色,示无Fe3+；或加数滴1%硫氰酸钾,若不出现红色,也示无Fe3+.
方法二：
维生素C的提取及含量测定
中文摘要：目的,1.学习维生素C定量测定的原理和方法.2.进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术.3.讨论用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定法的优缺点.4.概括了解维生素C的生理意义及其在新鲜水果中的含量.
维生素C能还原2,6-D.2,6-D在碱性条件下为蓝色,在酸性条件下为红色；维生素C易被2,6-D氧化为脱氢维生素C,而2,6-D本身被还原为无色；当维生素C全部被脱氢氧化后,滴入的2,6-D不能被还原,在酸性条件下呈现红色,即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化,从2,6-D消耗量可以计算出被检样品中维生素C的量.
关键词：维生素C；生物样品；测定方法；微量滴定管.
[引言]
1.别名：抗坏血酸、维生素丙、Ascorbic Acid .
2.性状：白色结晶性粉末；无臭,味酸；久置色渐变微黄；水溶液显酸性反应,易溶于水中,略溶于乙醇,不容于氯仿或*.熔点190~192℃,熔融是同时分解.
3.结构式:
4.发展：著名的诺贝尔奖获得者鲍林发现了维生素C,由此得以发展,目前 ,维生素已成为国际医药与保健品市场的主要大宗产品之一.中国是全球极少数能生产全部维生素品种的国家之一.其中,维生素C在世界国际市场具有举足轻重的地位.
5.功能：本品具有多种生理功能,参与氨基酸代谢及肾上腺皮质激素、神经递质、胶原蛋白和细胞间质的合成.可降低毛细血管的通透性、加速血液的凝固、刺激凝血功能、促进铁在肠内吸收、调整血脂、增加抗感染能力.参与解毒等,并具有抗组织胺及阻止致癌物质生成的作用.还具有消除氧自由基的作用,提高免疫能力,防止基因突变,改善心肌缺血,促进伤口愈合等.
[实验部分] 1 材料与方法 1.1 材料：木瓜、橙子. 1.2 仪器：研钵、吸量管(10mL)、容量瓶(50mL)、锥形瓶(50mL)、微量滴定管(5mL)、漏斗、纱布、滤纸、药物天平、玻璃匀浆器. 1.3 试剂 10％盐酸溶液(1500mL)、2,6-二氯酚靛酚钠溶液(2000mL)、标准抗坏血酸溶液（准确称取纯抗坏血酸结晶50mg溶于偏磷酸－醋酸溶液定容到250mL）、偏磷酸－醋酸溶液（称取偏磷酸15g,溶于40mL冰醋酸和450mL蒸馏水所配成的混合液中）. 1.4 方法 1.4.1 制备含维生素C的样品提取液. 将生物样品去皮,取少量肉,置于药物天平,得出其质量（g）.然后用玻璃匀浆器研成浆状,过滤.滤液转入50mL容量瓶中,用酸化的蒸馏水定容,混匀,备用. 1.4.2 滴定 量取样品提取液10mL于锥形瓶中.用微量滴定管,以2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定样品提取液,呈微弱的玫瑰色,持续5秒钟不退为终点,记录所用2,6-二氯酚靛酚钠的mL数.整个滴定过程不要超过2分钟.取10mL用10％盐酸酸化的蒸馏水做空白对照滴定. 计算：维生素C mg数/100g样品＝〔（Va—Vb）×S〕/W×100 式中：Va为滴定样品提取液所用的2,6-D的平均mL数； Vb为滴定空白对照所用的2,6-D的平均mL数； S为1mL2,6-D溶液相当于维生素C的mg数； W为10ml样品提取液中含量样品的g数. 2 结果 样品 质量(g) 配制溶液(mL) 取出溶液(mL) 消耗2,6-D(mL)
木瓜 6.9 50 20 1.50
橙子 11.3 100 10 4.65
已知维生素C的分子量为176,空白实验中2,6-D的消耗量为0mL.则橙子中维生素C的含量为(4.65×0.001L×0.1mol/L×176g/mol×10)/11.3g×100＝7.24g 即100g橙子（肉部分）中维生素C的含量7.24g 同理：100g木瓜中维生素C的含量为0.95g . 3 讨论 1.提取Vc时,加入4%偏磷酸-醋酸的作用是什么? 答：防止维生素在研磨过程中被空气中氧气氧化而影响滴定的测定. 2.为什么要选取稀酸作为提取溶剂? 答：2,6-D除可被维生素C还原外,也可以被其他还原剂还原为无色,但在酸性条件下,其他还原性物质的还原作用进行得很慢,且维生素C在酸性条件下比较稳定,故选用稀酸作为提取溶剂.