当用qRT-PCR验证了目的基因的表达后 还有必要用western做验证吗

当用qRT-PCR验证了目的基因的表达后 还有必要用western做验证吗 对PCR扩增后的目的基因如何进行提取 如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开? qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话 用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致.用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致,这个很费事,我一般是配50ul的内参基因pcr反应体系,分几 qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?文献提到U6作为内参基因,但是发现U6的种类也有很多,应该怎么选择?U6保守性高吗?不同植物的引 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? PCR扩增后的目的基因如何提取分离?对阳性克隆中的目的基因又如何提取分离? 在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时（扩增目的基因）,却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物 用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致.用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致,这个很费事,我一般是在一个管里配50ul的内参基因 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 用pet32a构建表达载体,目的片段是220bp左右,酶切是ecor1和hindlll,但酶切连接转菌提质粒后却只有2000bp做过pcr验证有目的条带,想不明白是为什么.2个月了,求救 怎么筛选目的基因,做PCR验证?快毕业了,在弄毕业课题,有点老火,我们是做体质问题的,比如我们设定正常体质是A,异常体质有三种,B,C,D.我们在前期用基因芯片技术已经对各组进行了基因检测.然 DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验证下,该用什么引物验证 关于PCR的问题：PCR如果目的基因扩增出来了是不是条带中的引物二聚体就没有了呀? 表达质粒构建中,做带有目的基因片段的pcr之前,需要对带有目的基因片段的质粒进行酶切吗?... 质粒转染肺癌细胞,转染效率一般能有多少?我用FUGW质粒直接转染肺癌株DH3,荧光显微镜下观察,转染效率大约30%左右,有进一步提高的潜力吗?如果我的目的是下调某个miRNA的表达量,能否用qRT-PCR