麦芽糖标准曲线的标定
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/06 09:43:51
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麦芽糖标准曲线的标定
麦芽糖标准曲线的标定
麦芽糖标准曲线的标定
标准曲线的绘制:取7支25ml刻度试管编号,分别加入麦芽糖标准液(1mg/ml)0,0.2,0.6,1.4,1.8,2.0ml,然后用吸管向各管加蒸馏水,使溶液达2ml,再各加3,5-二硝基水杨酸试剂2ml置沸水浴准确煮沸5min,取出冷却,用蒸馏水稀释至25ml,再分光光度计再波长520nm进行比色,记录吸光值,以吸光值为纵坐标,麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线.
样品测定:取以上各管中酶作用后溶液及对照管中的溶液各2ml,分别放入25ml具塞刻度试管中,再加入2ml3,5-二硝基水杨酸试剂,混匀,置沸水中准确煮沸5min,取出,冷却.用蒸馏水稀释至25ml混匀,用分光光度计在波长520nm处进行比色,记录吸光值,从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量,然后进行结果计算
结果计算:α-淀粉酶活性[麦`mg/(鲜重mg·5min)]=(A-A`)×样品稀释总体积/样品鲜重(g)×V
(α+β)-淀粉酶总活性[麦`mg/(鲜重mg·5min)]=(B-B`)×样品稀释总体积/样品鲜重(g)×V
式中:A为α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(在标准曲线上查得mg),A`为α-淀粉酶的对照管中的麦芽糖量(mg),B为(α+β)-淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量(mg),B`为(α+β)-淀粉酶的对照管中麦芽糖量(mg),V为比色时所用样品液体积(ml)
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