PCR结果呈弥散状是什么原因造成的我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/10 15:40:42
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PCR结果呈弥散状是什么原因造成的我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都
PCR结果呈弥散状是什么原因造成的
我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,谁能告诉我这可能是什么原因造成的,小女子感激不尽
PCR结果呈弥散状是什么原因造成的我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都
退火温度较低导致的非特异性扩增是造成你遇到问题的原因.你可以通过Touch Down PCR或者梯度PCR摸索最佳退火温度后重新进行PCR.
有杂质吧...
毛吉杨说要升高TM温度,我就遇到过那样的问题,升了就好了
跑完PCR后,产物最好是当天电泳。时间长了会降解。镁离子、dNTP等这些都会影响PCR结果的,退火温度也很重要,最好优化一下,找到最适退火温度。
1 模板浓度太高了,结果模板不能很好地和引物结合而自结合了
2 镁离子浓度高了,可能buffer里含有镁离子,你又加了一遍
3 单纯的退火温度问题也许不会造成全部弥散,适当提高些就好,一般比推荐温度高2-3度就可以
4 也许你看到的根本就不是扩增产物,你的引物不合适
5 最好给出你目标片段的大小或是范围,再说下你的程序,大家好帮你看看
6 做个肯定能扩出来的...
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1 模板浓度太高了,结果模板不能很好地和引物结合而自结合了
2 镁离子浓度高了,可能buffer里含有镁离子,你又加了一遍
3 单纯的退火温度问题也许不会造成全部弥散,适当提高些就好,一般比推荐温度高2-3度就可以
4 也许你看到的根本就不是扩增产物,你的引物不合适
5 最好给出你目标片段的大小或是范围,再说下你的程序,大家好帮你看看
6 做个肯定能扩出来的东西一起电泳,检查下是不是你的药品或设备有问题
哥哥我能想到就这些了
收起
1.你的引物是不是特异性不高?
2.延伸时间够不够长,一般是1k--1min?
3.退火温度是否过低?
4.电泳的问题应该不大,重新换个模板试一下。
是不是提纯没有做好呢,你再提纯做一次试试,要是你的样品本来就有问题的话你在怎么做都是无用功