酶基因缺失表达出现怪异现象我对甘露聚糖酶基因的ORF进行5’端和3’端进行缺失表达,经过信号肽预测后发现5'端前27个AA是信号肽,我就试着(一)切除5'端前33个AA,PCR酶切连接到pET28A里进行
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/05 20:11:53
![酶基因缺失表达出现怪异现象我对甘露聚糖酶基因的ORF进行5’端和3’端进行缺失表达,经过信号肽预测后发现5'端前27个AA是信号肽,我就试着(一)切除5'端前33个AA,PCR酶切连接到pET28A里进行](/uploads/image/z/14829833-65-3.jpg?t=%E9%85%B6%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%BC%BA%E5%A4%B1%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E5%87%BA%E7%8E%B0%E6%80%AA%E5%BC%82%E7%8E%B0%E8%B1%A1%E6%88%91%E5%AF%B9%E7%94%98%E9%9C%B2%E8%81%9A%E7%B3%96%E9%85%B6%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9A%84ORF%E8%BF%9B%E8%A1%8C5%E2%80%99%E7%AB%AF%E5%92%8C3%E2%80%99%E7%AB%AF%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E7%BC%BA%E5%A4%B1%E8%A1%A8%E8%BE%BE%2C%E7%BB%8F%E8%BF%87%E4%BF%A1%E5%8F%B7%E8%82%BD%E9%A2%84%E6%B5%8B%E5%90%8E%E5%8F%91%E7%8E%B05%27%E7%AB%AF%E5%89%8D27%E4%B8%AAAA%E6%98%AF%E4%BF%A1%E5%8F%B7%E8%82%BD%2C%E6%88%91%E5%B0%B1%E8%AF%95%E7%9D%80%EF%BC%88%E4%B8%80%EF%BC%89%E5%88%87%E9%99%A45%27%E7%AB%AF%E5%89%8D33%E4%B8%AAAA%2CPCR%E9%85%B6%E5%88%87%E8%BF%9E%E6%8E%A5%E5%88%B0pET28A%E9%87%8C%E8%BF%9B%E8%A1%8C)
酶基因缺失表达出现怪异现象我对甘露聚糖酶基因的ORF进行5’端和3’端进行缺失表达,经过信号肽预测后发现5'端前27个AA是信号肽,我就试着(一)切除5'端前33个AA,PCR酶切连接到pET28A里进行
酶基因缺失表达出现怪异现象
我对甘露聚糖酶基因的ORF进行5’端和3’端进行缺失表达,经过信号肽预测后发现5'端前27个AA是信号肽,我就试着
(一)切除5'端前33个AA,PCR酶切连接到pET28A里进行表达,有活性,(用透明圈法确定)
(二)切除5'端前40个AA,PCR酶切连接到pET28A里进行表达,无活性,
(三)切除3'端50个AA,PCR酶切连接到PET28A里进行表达,有活性,
(四)切除3'端60个AA,PCR酶切连接到PET28A里进行表达,无活性,
那么我同时切除5'端得33个AA和3'的50个AA,按理应该有活性,但是实验结果却是无活性
这是怎么回事呢?请大虾们帮我分析一下
我用我仅有的一点生物信息学知识对核酸序列和氨基酸序列进行了一些分析:
5'前27个AA为信号肽
中间大概300AA是GH26(糖苷水解酶26族)
核酸序列很新,用NCBI的BLAST无相关信息。
酶基因缺失表达出现怪异现象我对甘露聚糖酶基因的ORF进行5’端和3’端进行缺失表达,经过信号肽预测后发现5'端前27个AA是信号肽,我就试着(一)切除5'端前33个AA,PCR酶切连接到pET28A里进行
个人猜测:N端和C端部分序列虽然不是催化活性中心,但是对酶的高级结构维持具有一定作用,当同时缺失两端的序列时酶的高级结构无法维系,导致了酶的失活.
到底为什么恐怕还是要做具体序列的结构分析,本人不懂生物信息学,呼唤牛人出现分析你的序列(百度上应该没有).