要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/25 06:39:57
要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101
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要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101
要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?
我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?
kate_1018 我想问下如果用到12%的胶，跑的时间足够长，预染marker的位置和10%的达到同样位置的时候，这样两条带的差别还是会小于10%的胶吗？你说的“用好点的材料制备凝胶”，是说用好点的丙烯酰胺和甲叉吗？你说的“将电泳电压在后半程调高可改善条带清晰度”，是有实际经验的吗？还是理论上的？我一般都是 80浓缩

要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101
一般凝胶浓度低是容易出现条带模糊的情况.个人手法是：用好点的材料制备凝胶来进行分析.10%的浓度可以用来分离这两种蛋白,将电泳电压在后半程调高可改善条带清晰度.也可以调高分离胶浓度至12%,但差别会较10%的更小.是在不行可以考虑用梯度胶分.
“用好点的材料”是说的丙烯酰胺和甲叉.
“将电泳电压在后半程调高改善条带扩散”,我分离胶用135V,缩短电泳时间.
两种浓度的差别也不是太大.为了扩大差别,可以通过预染marker来控制电泳时间,将小分子的蛋白跑出去,用更多的凝胶长度来加大两者的差别.不过电泳时间延长对条带清晰程度会有影响.
样品的pH也会对条带的清晰程度有影响,以前做分子量和你的差不多大的酵母样时,条带就有些模糊.其实有时只要能将两者区分开,不一定非要追求最佳分离效果.
个人观点,仅供参考!

浓缩胶5%
分离胶12%

试试看看吧！

我想分离55KD和62KD左右的蛋白,请问下用哪种蛋白Marker? 要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101 40KD或50KD大小的蛋白用多大浓度的分离胶比较合适 western 想分开65和93kd的蛋白用多大浓度的分离胶 为何我用凝胶层析分离一个蛋白样品,老只有一个峰?我的蛋白样品是个四聚体44KD的,上柱的样品里面含44KD,22KD,11KD的蛋白,SDS-PAGE是3条带,凝胶层析的凝胶是琼脂糖,分离范围是10KD到100KD,可是每次 我要做westen,蛋白分子量大约7KD左右,需要多少浓度的分离胶啊?其具体配方是什么?7KD的蛋白需要多少浓度的分离胶? kd 35KD的蛋白,SDS-PAGE分离胶一般用多大的? 我做western,蛋白180KD,请问用多大浓度的分离胶即浓缩胶? 请问western blot 跑胶时积层胶和分离胶需要的电压是多大啊,还有转膜的,电压?我跑的蛋白有14kd到130kd的都有 蛋白分子量单位kD和相对分子质量怎么换算 分离与鉴定蛋白质已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8 分离22KD的蛋白质选择什么型号的超滤膜 【请问】怎样根据蛋白质大小确定SDS-PAGE电泳分离胶的浓度?比如我的蛋白20几个kD,分离胶的浓度需要多大? PLGA 50:50 的分子量12 kD,53 kD,143 kD中的kD是什么意思 做western blot,怎样根据分子量的不同配置不同浓度的浓缩胶比如我要做的蛋白是HIF-1α,其分子量为120KD,应该配多少浓度的分离胶? 蛋白质电泳的分离胶浓度,我要跑的蛋白质有120KD的,还有90几KD的,该用多大浓度的分离胶呢?谢谢各位啦 D 和 KD 是什么单位,