我在构建质粒：载体大小为9kb,目的片段为3.4kb,连接产物可以用普通的热击方法转化感受态Ecoli.DH5a吗?

我在构建质粒：载体大小为9kb,目的片段为3.4kb,连接产物可以用普通的热击方法转化感受态Ecoli.DH5a吗? 我已经有含有目的基因的T质粒了,怎样构建表达载体啊? 目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么? 真核重组质粒构建需要pMD18T载体么?我现在构建真核重组质粒,是合成引物,pcr出目的片段,目的片段的双酶切胶回收、pEGFP-C1质粒的双酶切胶回收,T4连接酶连接,转化,送去测序.想问下这步骤对么? 在构建基因表达载体时候,怎么利用选择培养基鉴别是质粒—质粒,目的基因—目的基因,还是质粒—目的基因 质粒载体如何构建 关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒载体用哪种比较好? 构建质粒载体2个月无果, 质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建de质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的.与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的 pUC19连接了大于3kb的片段,提取质粒时质粒变小了,丢了600bp,这样我就测不到目的基因序列,怎么办? 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶 目的基因片段与载体质粒的选择?多长的目的基因片段选什么样的载体质粒?这之间有些什么界限啊~哪个晓得回一哈下哦, 基因疫苗质粒载体的构建 设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括：质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤 基因连接载体和片段比例问题假如载体和目的片段浓度分别是10和40纳克每微升,载体和目的片段长度分别为4kb和1kb,各取一微升,摩尔比为1：4,请问这个计算结果对吗,很困惑, 为什么抽提的质粒大于目的片段和载体的和