作业帮考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量应该注意什么/
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/20 11:50:19
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量应该注意什么/
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量应该注意什么/
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量应该注意什么/
1．大量的去污剂如TritonX-100、SDS等严重干扰测定.
2．蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合的反应十分迅速,在2min左右反应达到平衡；其结合物在室温下1h内保持稳定.因此测定时,不可放置太长时间,否则将使测定结果偏低.
一楼的 完全正确
考马斯亮蓝与蛋白质结合是一个很快的过程，约2 min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1 h。之后，蛋白质-染料复合物发生聚合并沉淀出来。一般在反应5min后开始测定。
选用的标准品预先用凯氏定氮法准确测得蛋白纯度，然后根据需要，用NaCl溶液或蒸馏水配制成标准溶液（含标准蛋白100μg/mL）。
最好用去离子水配制试剂。
先将考马斯亮蓝配制成母液（低温下可长期放置），...
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考马斯亮蓝与蛋白质结合是一个很快的过程，约2 min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1 h。之后，蛋白质-染料复合物发生聚合并沉淀出来。一般在反应5min后开始测定。
选用的标准品预先用凯氏定氮法准确测得蛋白纯度，然后根据需要，用NaCl溶液或蒸馏水配制成标准溶液（含标准蛋白100μg/mL）。
最好用去离子水配制试剂。
先将考马斯亮蓝配制成母液（低温下可长期放置），工作液要现用现配。都避光、低温保存。
做标准曲线时，其回归方程的相关系数应达到3个9(即r值至少为0.999)，标准曲线方可用。试剂或仪器更换，一定重新做标准曲线。
测定样品的条件一定要与做标准曲线的条件相一致。
蛋白糖化物对考马斯亮蓝法存在干扰，因此，应用考马斯亮蓝法测定含糖基蛋白的制品时需进一步改进。
去污剂（如 Triton X-100、SDS），Tris，NaOH，植物样品中的酚类、有机酸等，是常见的干扰物。
试验中所需器皿一定要干净、干燥，各试液取量一定要准确。
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还有少量去污剂可校正