请问我提取蛋白,测浓度是2.0mg/ml,可是做sds-page电泳却看不到条带,不知道原因是什么我是让同学帮我跑的电泳,用时2.5个小时,我用的是试剂盒定量的,Bradford法》,用的波长是570nm。我同学
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/27 14:50:46
请问我提取蛋白,测浓度是2.0mg/ml,可是做sds-page电泳却看不到条带,不知道原因是什么我是让同学帮我跑的电泳,用时2.5个小时,我用的是试剂盒定量的,Bradford法》,用的波长是570nm。我同学
请问我提取蛋白,测浓度是2.0mg/ml,可是做sds-page电泳却看不到条带,不知道原因是什么
我是让同学帮我跑的电泳,用时2.5个小时,我用的是试剂盒定量的,Bradford法》,用的波长是570nm。我同学的跑出条带来,我的却没有,补充一下,我的是菌体全蛋白》,他们说是我的样本浓度太高了,电泳不出来,请问是这种原因么????
请问我提取蛋白,测浓度是2.0mg/ml,可是做sds-page电泳却看不到条带,不知道原因是什么我是让同学帮我跑的电泳,用时2.5个小时,我用的是试剂盒定量的,Bradford法》,用的波长是570nm。我同学
可能有以下几个原因:
一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)
二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的
三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是共轭双键的吸收波长,很多物质都会有吸收,如果做亲和层析时咪唑也有吸收,RNA在280下也有吸收,可能你测得的是RNA?
最后,想问问你的蛋白质Marker有没有显示条带?
可能原因:
1. 上样太少。10ul就够了。注意变性时不要有太多沉淀,点样时要沉在点样孔底部。
2. 染色问题。marker正常吗?
3. 浓度测定不准。
有可能。浓度太高变性时会沉淀,进不去胶。不过2.0mg/ml也不算太高。加loading buffer后混匀,再加热。...
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可能原因:
1. 上样太少。10ul就够了。注意变性时不要有太多沉淀,点样时要沉在点样孔底部。
2. 染色问题。marker正常吗?
3. 浓度测定不准。
有可能。浓度太高变性时会沉淀,进不去胶。不过2.0mg/ml也不算太高。加loading buffer后混匀,再加热。
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是不是时间不够?
怎么测的浓度啊。。。