【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 04:35:54
【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的
xUR"W~LUɔ)J")+/VbD{nGPD1>i~!tC&[*k}pg ioA^[kߺ^䠗K10e; (Z]lB"k(t\WPj1 zLxC+B[)&uUdi(d17DIWpEN)&cA]j5c E8yB" !2T<~|*R12&8 M~V¿3{dFehߗqqK@8Y

【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的
【求助】Real-time PCR 引物设计求助
通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的错配就是有dimer or cross dimer,得到的最好的一对primer如下：sense:5'GTCTTTCGGATTTCGC Tm 47.9 ,GC 50 ,length 16 ,none(hairpin,dimer,false priming,cross dimer )anti-sense:5'TCGAGGATTTCAACACTGT Tm 47.2 ,GC 42.1 ,length19,found dimer(自由能-7.3) none othersproducts size：209我觉得这对引物的Tm值过低,产物又过长,请问各位前辈,这对引物能用于定量PCR中吗?如果我们设计的引物在一个外显子上对定量的影响有多大?有什么办法可以减小引物在一个外显子上对定量的影响?

【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的
博凌科为-为你1.跨越内含子主要为了避免抽提、反转录过程中残留基因组DNA污染的干扰,因为基因组DNA是不会存在两个外显子连续这样一段序列的,如果引物只在一个外显子上就要冒这种风险2.个人感觉引物能不能工作,上下游引物的Tm值要接近,这个最重要,至于别的发卡,茎环等就要看运气了,不行的话就再试几个,实在不行就用老外文献上的引物好了,记得注明参考文献就行了.good luck

你引物的参数确实有问题。
如果引物设计困难，结果不理想。重新设计在一个外显子上也没有不可，不过在提取RNA的时候要加一步DNA酶消化。如果你用的是QIAGEN的试剂盒，就按照里面的原柱DNA酶消化就可以了。不一定非要纠结于外显子-内含子交界区。
我这样做过很多，完全不用担心的。...

全部展开

你引物的参数确实有问题。
如果引物设计困难，结果不理想。重新设计在一个外显子上也没有不可，不过在提取RNA的时候要加一步DNA酶消化。如果你用的是QIAGEN的试剂盒，就按照里面的原柱DNA酶消化就可以了。不一定非要纠结于外显子-内含子交界区。
我这样做过很多，完全不用担心的。

收起

什么是real-time PCR原理、定义、引物选择 【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的 用real time pcr 引物可以做一般pcr 结果电泳的会不会没有意义? 关于real time PCR 引物设计的问题我想设计几个植物中基因的引物,然后进行real time PCR,引物设计有什么要求或是注意事项吗?有哪些设计技巧呢? 求助关于Real-Time PCR的英文文献求一篇关于Real-Time PCR的英文文献,最好不要太长.关于技术方面的. 如何设计real-time PCR 引物请问我想设计一个基因的引物,既能扩增人类也能扩增小鼠的该基因,该如何操作呢? 下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好real time pcr检测几个基因的表达量,现在提取rna后做逆转录,买的takara的逆转录试剂盒,不知道应该选随机引物还是o 北京哪里能做real time PCR real time PCR需要哪些试剂盒 PCR,RT-PCR,GAPDH.real time之间的联系. RT-PCR和Real time-PCR有什么区别 Real-time PCR和RT PCR有什么区别? 荧光探针real time PCR 实验中在同一体系中加入多对引物可以吗?实验方法是怎么的?这样做的话,不同对引物之前有没有竞争关系,出来的结果有意义吗? real-time PCR 、quantitative RT-PCR 和absolute quantitative real-time PCR的区别这三种PCR的区别是什么,最好能详细点,第二个是quantitative real-time PCR,再补充一个real-time RT-PCR real pcr 如何处理Real time PCR的数据结果 如何处理Real time PCR的数据结果 可以对Real-time PCR数据处理的软件.