大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/20 11:52:03
大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN
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大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN
大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?
以下是我的步骤：
猪瘟疫苗216bp片段克隆
1、PMD-18T vector 1ul
216bp胶回收产物 4ul
2、加入5ul的SolutionⅠ
3、16℃连接过夜（大约20h)
感受态细胞的DNA转化：
1.制备好的感受态细胞从—70℃冰箱取出后在冰水混合物中融化10min
2.取100ul感受态细胞,置于1.5ml离心管中.
3.向感受态内加入5ul连接过夜的DNA,轻轻混匀后冰中放置30min.
4.42℃90s,立即入冰中2min.
5.加入1ml37℃的预温营养肉汤.
6.37℃,120r/min,1h培养.（在1.5ml里装着）
7.4000rpm,4℃,离心2min后,取出100ul涂于Amp板上.（Amp是按1/1000的量加入普琼上的）.
8.过了18h 都没长.

大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN
当然要先用液态不加抗生素的LB复苏好不好.
不要纠结在转化涂板的过程上 要么就是你的质粒酶切完后回收的片段不对 要么就是你的胶回收产物不对

转化实验为什么要先用液态的LB后用固态的培养基呢? 转化实验用液态的LB一般经37度倒置培养12-16h后，就可以看到有单个克隆长出，就可挑取了。 ..

你用什么酶做的PCR？连T载体末端必须有A
感受态还有没有用？最好转个质粒验证一下，做这个感受态是非常重要的。
胶回收的时候有没有把wash buffer 蒸发干净？

质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素 大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN 大肠杆菌DH52a感受态细胞 大肠杆菌感受态细胞转化实验中冰浴的作用是什么? 为什么大肠杆菌感受态细胞制备和转化转化实验为什么要先用液态的LB后用固态的培养基呢? 为什么感受态细胞没有细胞壁? 大肠杆菌感受态细胞制备试验中为什么转化后要在37℃摇床上温育45min 如何制备大肠杆菌感受态细胞 在做转化时,外源DNA与感受态细胞混匀后为什么要冰上放置30分钟后热激? 大肠杆菌转化的机理与感受态细胞的制备方法的研究进展（希望答案详细） 不同的转化子可以同时进入同一个大肠杆菌感受态细胞吗 大肠杆菌感受态转化的原理是什么? 转化实验中除了用大肠杆菌的感受态细胞还可以用哪种菌的感受态细胞?如题,不同的实验中是不是用不同的感受态细胞?都有哪些种类的感受态细胞? 如何冻存大肠杆菌感受态细胞 大肠杆菌制备感受态细胞和重组子转化实验中,没有实验结果大肠杆菌制备感受态细胞和重组子转化实验中,将重组子放在含抗生素的培养皿中培养,也就是用蓝白班的方法,但是培养皿上什么颜 大肠杆菌里面有质粒吗?如果大肠杆菌有质粒的话,那做转化的感受态细胞里有没有质粒啊?如果有质粒是不是也有抗性基因?那蓝白筛选还有意义吗? 外源DNA转化非感受态大肠杆菌的方法除了氯化钙处理法、电穿孔法,还有什么方法?