作业帮做鼠细胞培养实验的具体步骤最好是鼠肝细胞或者肺细胞.越详细越好...
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/24 21:54:52
做鼠细胞培养实验的具体步骤最好是鼠肝细胞或者肺细胞.越详细越好...
做鼠细胞培养实验的具体步骤
最好是鼠肝细胞或者肺细胞.越详细越好...
做鼠细胞培养实验的具体步骤最好是鼠肝细胞或者肺细胞.越详细越好...
原代细胞培养吗?
你看看这个：
1.组织修剪、漂洗：修剪去除血管等杂组织,D—Hanks液中漂洗数次,以除去血块等.
2.剪切：将心室肌用锋利的眼科剪反复剪切组织至剪成1～2mm3小块,在剪切过程中,可以适当向组织中滴加1～2滴培养液,以保持湿润.
3.消化：将组织小块转移至100ml的玻璃瓶中,再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,37℃摇床消化6min左右.
4.细胞分离：消化完毕,用吸管轻轻吸吹几下,使组织小块散开,静置2min后,吸取上面的混悬液（弃去第1次的混悬液）,经140目尼龙网膜过滤至盛有终止液试管中,1000rpm,离心10分钟,弃去上清,加适量的培养液悬混.在装有组织小块的玻璃瓶中再加入30～50倍组织量并预温37℃的0.08%胰酶消化液,重复第4、5步骤,直至大部分组织小块消失.
5.细胞计数：将上述获得的细胞悬液,吸出少许,适当稀释,加台盼蓝溶液染色,用红血球计数板计数活细胞和死细胞,计算细胞密度和存活率.
6.细胞接种：将细胞接种至30ml的培养瓶中,每瓶6×105,用含15%小牛血清的DMEM培养液培养.
7.培养：5%CO2、37℃培养箱培养12h,显微镜下可见细胞贴壁,呈多角形,培养24h,镜下见细胞已连结在一起,部分细胞开始搏动.
8.换液：培养3～5d,细胞换液.
好久没看书了，具体我忘了
百科中查的，记得大致是这样
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），处理形成单个细胞，将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配...
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好久没看书了，具体我忘了
百科中查的，记得大致是这样
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），处理形成单个细胞，将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。当培养超过50代时，大多数的细胞已经衰老死亡，但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性，即癌变。此时的细胞被称为细胞系。
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