基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%!

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/12/03 04:36:06
基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%!
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基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%!
基因克隆和序列分析相关问题
我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!
我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%! 两次测序结果都差不多,但为啥与文献上的序列差别这么大呢?
我做的是不同品种葡萄相同合酶基因的克隆和序列分析,请问我拿到这些结果需要做哪些分析?各有何意义?

基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%!
1.测序最好克隆到载体后进行,比直接测PCR产物好
2.测序短,说明你的样本里有抑制剂,比如EDTA等.样本要用水稀释,不能含有抑制剂
3.同源性只有34%,说明不是同一种属的.
4.如果有好几个,那你可以做一个进化树分析,看看远近程度.

首先高质量的测序结果需要好的样品来进行是测序成功前提。一个反应成功一个取消，可能存在为非特异扩增。或者单引物扩增现象存在。还有就是引物问题，一般兼并引物、随机引物及标记性引物、不纯的引物及长片段引物等不适合测序。测序必须为特异性引物。还有就是可能存在结构.具体的原因结合峰图才能够确定.建议您克隆载体实验.
你测序所得峰图是否单一.如果不是单一峰图你比对有所差异很正常.
如果为单一...

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首先高质量的测序结果需要好的样品来进行是测序成功前提。一个反应成功一个取消，可能存在为非特异扩增。或者单引物扩增现象存在。还有就是引物问题，一般兼并引物、随机引物及标记性引物、不纯的引物及长片段引物等不适合测序。测序必须为特异性引物。还有就是可能存在结构.具体的原因结合峰图才能够确定.建议您克隆载体实验.
你测序所得峰图是否单一.如果不是单一峰图你比对有所差异很正常.
如果为单一峰图存在差异原因：一是，PCR扩增过程中产生错误，其次，测序准确率的问题。由于测序仪准确率的限制，在一个较长的序列中发生碱基错误是难以避免的。在确认克隆准确无误的情况下，通过双向测序可以最大限度的减少测序的错误。只进行单向测序无法保证完全准确，这是仪器ide精确度来决定的。而您的只有部分能够比对，在峰图单一的情况下可以设计引物获得全序列。再与文献序列进行比对.排除测序造成.其次如若为套峰，那就是扩增问题.具体的你可以还可以咨询当时的测序公司技术。

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基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%! 我如果目的是为了得到该基因的表达产物,而克隆基因,那么引物设计是否上游和下游分别在序列的两端啊?另外,序列是cdna序列还是cds序列? PCR扩增抗除草剂基因为什么是克隆? 关于PCR产物的理解既然CDNA无内含子和外显子的区别,那么以它为模板扩出的目的基因的序列不就也没有内含子和外显子的区别,那扩增的这个基因不就错了吗?请问我这么理解哪里出错了?请不 PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?我也遇到了这样的问题,做负链RNA病毒RT-PCR的时候,我不知道以哪个为模板设计引物,是用原始序列设计 如何扩增序列未知的基因片段 如何进行DNA的结构分析我获得了一段DNA序列,是以DNA为模板PCR扩增的来的,请问如何使用NCBI来对这个序列进行结构分析,区分出它的内含子和外显子序列,并得到其对应的氨基酸序列?我是一个初 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列我要克隆一个基因,从NCBI查到该基因近似物种的mRNA(没有查到cDNA).我的路线是先提取RNA,反转录 基因的PCR扩增出现非特异扩增产物,何故? 在PCR产物基础上如何设计RACE引物,其原理是怎样的?我未做过RACE.看了你对“未知基因扩增”的回答,觉得你是个专家.也许我没说清楚。按某同源基因的保守序列扩增好了基因的内部连段，然后 基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时 下图琼脂糖凝胶电泳的结果分析 目的是PCR方法检测BT玉米的外源基因泳道从左到右依次为：1.Cry1Ab基因PCR扩增产物(以泳道6的DNA为模板） 2.Cry1Ab基因PCR扩增产物(以泳道8的DNA为模板）3.PCR阴性 已知氨基酸序列,如何克隆出基因 知道蛋白序列,如何克隆这个基因 如何利用同源序列克隆目的基因 求生物大神解答、与pcr技术有关利用pcr技术扩增目的基因时,引物1和引物2的碱基序列能互补吗? 基因的构建与基因的克隆是指一个意思么?就是通过PCR扩增获得目的基因?问题很小白哈. 是做基因克隆还是pcr产物直接测序?我从某植物转录组测序结果中找到一个基因序列,结果预测是有完整ORF的,但我在orf两侧设计引物pcr产物直接测序,多次测序的结果在orf两端的序列都不同,orf