作业帮请问蛋白质提取的试剂有什么?如题.主要是植物蛋白
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 05:21:35
请问蛋白质提取的试剂有什么?如题.主要是植物蛋白
请问蛋白质提取的试剂有什么?
如题.主要是植物蛋白
请问蛋白质提取的试剂有什么?如题.主要是植物蛋白
一、植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入）,准备提取液放在冰上.
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）.
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清液,样品制备完成.
蛋白质提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
二、植物组织蛋白质提取方法
氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清.
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇）,摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时）,然后真空干燥沉淀,备用.
4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准）,可临时保存在4℃待用.
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用.
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮.裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml）,使用前再加入1M的DTT65ul/ml.
这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
三、植物材料：水稻苗,叶鞘,根
1、200毫克样品置于冰上磨碎
2、加lysis buffer,离心,10000rpm,4度,5min取上清
3、重复离心5min
lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
四、蛋白质样品制备
秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行.
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制,含10mM即0.07%β-巯基乙醇）,混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000 r/min离心15 min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,（有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干.
按每mg干粉加入20μl（可调） UKS液[9.5 M尿素,5mM碳酸钾,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫苏糖醇),2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc,pH3.5-10),6% Triton X-100],37℃温育30min,期间搅动几次,28度 （温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min,离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳.或者-70度保存
五、植物根中蛋白质的抽取
(1) sample,液氮研磨
(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube
(3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul
(4) 12000 rpm,4度,10-15minite
(5) 取上层液,蛋白质就在里面
一般采用离心法,试剂是不常用的
氯醋酸—丙酮沉淀法
有转么的试剂盒，要不自己太费劲了