LA Taq pcr的问题我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/29 06:11:54
LA Taq pcr的问题我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗?
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LA Taq pcr的问题我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗?
LA Taq pcr的问题
我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗?

LA Taq pcr的问题我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗?
LA Taq是一种保真度非常高的DNA聚合酶,出现这样的问题你应该在自己的PCR反应体系组分以及循环条件上找原因,当然还是老方法——排除法.

一般来说,测序结果很少出错的。建议你从一下几个方面着手:
1 给出的测序结果可能是你基因的互补链,所以当你比对的时候就会显示很多错配的,你用反向互补序列再比对下。
2 你的序列需要两个反应,多出的可能是序列拼接的时候出的问题,你对照测序图谱看下,在两个反应的交叉位置。
3 若上面的原因都不是,若你PCR的效果(条带的亮度,大小,特异性)都很好,那就是你引物特异性的问题了,这...

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一般来说,测序结果很少出错的。建议你从一下几个方面着手:
1 给出的测序结果可能是你基因的互补链,所以当你比对的时候就会显示很多错配的,你用反向互补序列再比对下。
2 你的序列需要两个反应,多出的可能是序列拼接的时候出的问题,你对照测序图谱看下,在两个反应的交叉位置。
3 若上面的原因都不是,若你PCR的效果(条带的亮度,大小,特异性)都很好,那就是你引物特异性的问题了,这个好好核对下。

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如果1300bp的片段都能出现很多错配的话,建议你检查你的LA Taq的质量。一般普通的Taq在正常条件下1KB片段也才出现2~5个错配。

pcr和测序都可能出错:
PCR特异性如何,有没有杂带?用什么测序,PCR产物还是质粒?纯化没有?浓度够不够?
测序图谱好不好?错配集中在一处还是分散?附近有没有特殊结构,如简单重复、回文?是在测序反应末端吗?

LA Taq pcr的问题我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗? 我的taq酶进行梯度pcr为什么没有结果?引物和模板都没有问题,用la TAQ都能p出来目的片段由于要进行菌落pcr,la taq太贵了,所以需要使用普通taq进行.同一批次的引物在两个月之前还可以p出目的片 用LA Taq 酶扩增一3Kb的基因组DNA ,我要怎样设计反应条件呀? takara LA Taq 酶 ExTaq哪个更好 LA taq酶能保存多长时间 ha ku la ma ta Ha ku la ma ta ta? Je suis la soeur de ta petite amie的解释? 一首经典英文歌la la la la la,la la la la la,la la la la la la la la la,do do do do do,ah~RT 女声 不是快节奏的 是慢节奏非常抒情的情歌 中间有一段是这样的:la la la la la,la la la la la,la la la la la la la la la,do d la La la la Basshunter - I Can Walk On Water 这个歌怎么用中文唱比如开头的La la la la la 长pcr引物设计以及扩增条件我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的 意大利语口语问题意大利的da,ta.ba,pa.la,ra.ca,ga.正确应该怎么读,我怎么觉得da和ta是一样读法,最好可以用中文帮我标一下各个的读法,最好能在列举几个单词. La la la la la li done .la la la la la li done .la la la la la li done da la 是英文歌来的 是什么歌今天偶尔听到一首英文歌DJ的大概节奏是La la la la la li done .la la la la la li done .la la la la la li done da la .想请问 Cant Get You Out Of My Head 的歌词译文《Cant get you out of my head》--Kylie Minogue La la la La la la la la La la la La la la la la La la la La la la la la La la la La la la la la I just can't get you out of my head Boy your loving is all I t