过短的PCR产物为什么不适于直接测序?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/27 19:11:49
过短的PCR产物为什么不适于直接测序?
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过短的PCR产物为什么不适于直接测序?
过短的PCR产物为什么不适于直接测序?

过短的PCR产物为什么不适于直接测序?
首先过短的PCR产物纯化困难,一般的PCR产物纯化试剂盒都要求PCR产物片段大于150bp,过短的 PCR产物纯化和准确定量都非常困难.因此我们要求用于测序的PCR产物一般不低于150bp长度.其次,由于测序技术本身的限制,测序反应对环境的干扰比较敏感,模板太短的PCR测序受外界的 干扰更大,很容易造成测序失败.--------转自三博远志网站(测序FAQ)

这里有两个问题，pcr产物测序和pcr过短的问题
熟悉pcr产物测序原理就明白，前面20-30个bp测出来市数据是不准确的，测序范围大概是800左右，超过的需要双向测序。
过短的pcr产物，pcr测序肯定需要纯化的，如果太短的话，在胶回收的时候很可能影响pcr产物浓度。一般pcr送样测序的条件A未纯化PCR产物的要求，1. 片段大于200bp；2.请提供50ul PCR扩增产物(总...

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这里有两个问题，pcr产物测序和pcr过短的问题
熟悉pcr产物测序原理就明白，前面20-30个bp测出来市数据是不准确的，测序范围大概是800左右，超过的需要双向测序。
过短的pcr产物，pcr测序肯定需要纯化的，如果太短的话，在胶回收的时候很可能影响pcr产物浓度。一般pcr送样测序的条件A未纯化PCR产物的要求，1. 片段大于200bp；2.请提供50ul PCR扩增产物(总量1ug-2ug)；3.取3ul样品，应该能够清晰的分辨出目的条带； 自带引物，引物浓度不低于5uM,并请注明。B纯化后PCR产物的要求1.PCR产物溶于蒸馏水中(请勿溶解在TE溶液中)；
2.浓度大于20ng/ul，体积大于10ul，长片段需适当增加量；3.电泳检测条带专一； 自带引物
价格都不是很贵，一般能22-25元一次。

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目前用的测序仪一般是基于PCR方法的sanger法原理，
那么用你的PCR产物为模板，测序引物从最两端开始，么测序时由于测序仪的毛细电泳管分辨率问题，测序引物后的50个左右长度碱基测不出。
测序仪通常从测序引物起延伸50个左右bp后，才能分辨，读出序列。
当然，如果你用第三代或第四代测序技术， 称为next generation DNA sequencing 或next ...

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目前用的测序仪一般是基于PCR方法的sanger法原理，
那么用你的PCR产物为模板，测序引物从最两端开始，么测序时由于测序仪的毛细电泳管分辨率问题，测序引物后的50个左右长度碱基测不出。
测序仪通常从测序引物起延伸50个左右bp后，才能分辨，读出序列。
当然，如果你用第三代或第四代测序技术， 称为next generation DNA sequencing 或next next generation DNA sequencing，那么再短的PCR产物也能测出来。这种新的测序方法通常最长也就是测50到60bp。

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过短的PCR产物为什么不适于直接测序? PCR产物直接测序的原理 为什么我们进行16S rDNA测序时,要将扩增产物导入的细菌中,而不直接对纯化后的PCR产物直接测序? PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教, PCR产物测序 如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转 我loading buffer直接加到PCR产物中了,不知道影不影响PCR产物直接纯化PCR产物出来后 直接加了loading buffer,然后取5ul走的电泳,剩余的PCR产物含有loading buffer,不知道能不能直接用PCR纯化试剂盒纯化,l pcr产物不纯化直接酶切连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响哦~ 有没有人用过天泽的胶回收试剂盒,怎么样,是不是可以直接提取PCR后的产物,不经过跑胶 PCR产物的纯化方式有哪几种?是用于测序的PCR产物， 10kb pcr产物 测序如何对10kb的pcr产物测序? PCR产物电泳大小与实际测序不符,为什么? 我的PCR产物电泳检测条带单一,为什么测序结果说模板杂? PCR产物可以直接测序吗 请问,把PCR产物拿去生物公司测序的问题是不是也是先要将PCR产物DNA连到载体上,再用载体的通用引物测序?应该不是吧……这个应该属于克隆测序吧?PCR产物直接测序是否就是直接用你给他的引 测序上游引物损坏怎么办?PCR产物直接测序,寄到时候发现装有上游引物的小管裂开,引物不能用了,只能重新邮寄上游引物吗?只有下游引物不能测吗? 氨基酸饥饿和PCR问题1.什么是氨基酸饥饿?细菌表型会发生怎样的变化?2.PCR预变性时间过长或者过短对于PCR产物有什么影响? PCR纯化产物为什么能直接连接,什么情况下直接连接?求高手指教.