RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/15 10:41:28
RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方
xTn@!+!xEnR;v'is8\8 & )/9s9+gr٣Ϡj` A5p^fO`#룾 evM7Q4:%״7V†P]BO;#JVti}y>ssgijZO$pN4Z@U6Uݦ>JIj\$գ8=N"#$[ca&Wo#'-\E<z ^XBJuP#Qͤ?^Ɩg?}۔;mVlL} H)䗚T@O52ſO3ԨsU8-bPU.a=fj~\2A3ญ?rC->%b NR"mfpcF顼Œ8eW~g]\] S@FEVvM7D%K&oO

RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方
RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方

RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方
我不了解你的实际情况,我给你几条建议:
1.可能是内参引物有问题
2.你扩增内参基因的PCR条件设计可能有问题,如Tm
3.你用的是一块胶吗?加核酸染料了吗?

目标基因有条带,说明模版和试剂没有问题。
但内参基因没有扩出来,可能是扩内参基因的引物有问题,或者是扩增的条件有问题啊,退火温度不合适内参基因的扩增。
你可以先做做普通PCR摸一下条件,找到内参和目标条带都能很好扩出来的条件和引物再上荧光定量啊。做一次荧光定量也好几百块钱捏。...

全部展开

目标基因有条带,说明模版和试剂没有问题。
但内参基因没有扩出来,可能是扩内参基因的引物有问题,或者是扩增的条件有问题啊,退火温度不合适内参基因的扩增。
你可以先做做普通PCR摸一下条件,找到内参和目标条带都能很好扩出来的条件和引物再上荧光定量啊。做一次荧光定量也好几百块钱捏。

收起

单独用内参引物做一次,还出不来,可能内参引物问题,可从相关文献中找你的物种的内参引物

RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方 RNA的反转录产物应该有几条带,我用olig dt和随机引物做的反转录 想学习一些分子实验技术,比如设计引物、提取RNA、反转录、凝胶电泳、克隆基因核心片段、内参引物相关知识能否给我一些资料,最好是包括实验原理和实验操作步骤,还有使用到的仪器的使 应用Oligo (dT) 作为引物,合成的cDNA含有目的基因和内参基因吗?或者,获得的cDNA 是不是扩增的总RNA刚接触PCR不久,1、在RNA逆转录获cDNA 应用Oligo (dT)18 作为引物,合成的cDNA含有目的基因和内参基因 猪GAPDH基因和β-actin基因的的序列或者是登入号我要做普通的PCR和反转录PCR,所以需要内参基因的序列设计引物,知道的请帮下忙 qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?文献提到U6作为内参基因,但是发现U6的种类也有很多,应该怎么选择?U6保守性高吗?不同植物的引 用反转录病毒作为基因工程运载体时,是将目的基因插入反转录病毒的RNA 当中吗 最近在进行MICRO-RNA实验,在进行反转录和荧光PCR及引物设计有没有好产品?我急需进行验证实验ABIOM的试剂盒有点贵,加起来所需得18000多,公司给介绍了EXIGEN的,内参用的GPDH,是人的,在不同管里 刚接触PCR不久,1、在RNA逆转录获cDNA 应用Oligo (dT)18 作为引物,合成的cDNA含刚接触PCR不久,1、在RNA逆转录获cDNA 应用Oligo (dT)18 作为引物,合成的cDNA含有目的基因和内参基因吗?或者,获得的cDNA 是不 我要做CTGF和BMP-7的反转录RT-PCR,引物如何设计?内参怎么选择?GAPDH和b-actin哪个能用? 在RNA复制和转录的过程中引物分别是什么? 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列我要克隆一个基因,从NCBI查到该基因近似物种的mRNA(没有查到cDNA).我的路线是先提取RNA,反转录 我要做荧光定量PCR,测细胞因子mRNA,要测三种因子,是否是把三种引物和内参基因引物分别加入到四个体系中 半定量rt pcr内参和目的基因的引物加的量相同吗,能否放在同一管中跑PCR microRNA茎环引物设计及RT-PCRmicroRNA的茎环引物可以自己设计吗?是不是线性序列发到公司合成就行?有没人已经做过该实验?microRNA定量时的内参一般选择哪些?在反转录的时候因为内参基因的反转 求助水稻的actin 内参基因引物想用水稻的内参做荧光定量PCR,有哪位大侠有水稻内参Actin的引物么?在下感激不尽! RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?我做反转录的操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水,65C反应10min,冰上放置5min后,再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,反应25℃10min,37℃60min,70℃10min.我想 提完RNA后,用TAKARA的反转录试剂盒做反转录,结果出现三条带,是怎么回事?如图所示,