作业帮关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/26 06:21:34
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关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
关于PCR的问题?
问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
1、预变性（Initial denaturation）．
模板DNA完全变性对PCR能否成功至关重要,一般95℃加热3-5分钟.
2、引物退火（Primer annealing）
退火温度一般需要凭实验（经验）决定.
退火温度对PCR的特异性有较大影响.
3、引物延伸
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）.
延伸时间随扩增片段长短而定.
4、循环中的变性步骤
循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性：
变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败.
5、循环数
大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增.
6、最后延伸
在最后一个循环后,反应在72℃维持
可见94度左右应该是在这个温度能使各种靶DNA序列完全变性,这是生物学家已经研究的理论成果,72度是Taq酶最适温度,只有在这个温度下,该酶的活性才能达到最大!
关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行?
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