我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 16:32:38
我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?
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我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?
我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?

我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?
扩增效率理论上不可能超过2.计算值超过2,可能是因为PCR效率不高或者不稳定,结果线性度差,导致某个区间的数据点计算出来的扩增效率反而大于2.这样的标准曲线如果作图的话,数据点都不在一条直线上.
一般都是试剂扩增效率有问题,离子浓度不对,或者酶比较劣质.也有可能是引物不好.可以先换一对已知有效的引物,比如常见的内参的已验证引物,如果用同样的试剂和体系能做出好的曲线,E接近2,那就是引物问题,如果这样也做不出来,就换试剂.
仅供参考,我很少做外标曲线,只有偶尔更换试剂体系的时候会做个梯度,一般曲线不好的话,取的数据点不同,E值会忽高忽低.整个线就是歪的.基本上都是试剂有问题.引物扩增片段不超过500bp应该不会影响扩增效率.你先把PCR产物电泳看看有没有问题,条带没问题,基本上引物就问题不大.

我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢? 荧光定量PCR做标准曲线,普通PCR扩增效果良好,荧光定量PCR标准曲线作图斜率只有1.02,是什么原因?引物浓度已经从0.6Ul,调整为0.8ul和1.0ul, 请问做实时荧光定量PCR实验时,为什么做标准曲线? 请问做荧光定量PCR时每次都需要做标准曲线吗?我是用荧光定量PCR对粪便中的细菌做绝对定量，每做一批样本都需要做一次标准曲线吗？ 荧光定量pcr做荧光定量pcr的绝对定量时为什么要构建标准质粒,利用质粒构建标准曲线,为什么不直接用DNA模板构建标准曲线呢? 我要用CT法做荧光定量PCR,请问需要做标准曲线吗?关于浓度,是不是在反转录时将RNA浓度调一致? 我做荧光定量pcr taqman 探针,标准曲线不好,ct值没有按等差数列增加,怎么办? 荧光定量PCR绝对定量时的标准曲线优劣的判断指标有哪些呢? RT-PCR的绝对定量的标准曲线谁做过荧光定量中绝对定量的标准曲线.我第一次做,没做过,希望做过的人给予指导 怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确 realtime ）就是想做个梯度稀释的cDNA的标准曲线,请问我应该怎么做,我用的是Roche的荧光定量PCR仪,请问我是选相对定量还是绝对定量做曲线啊? 荧光定量pcr,做标准曲线时,同一个样品做三个点,我做的三个点之间的距离很远什么原因不知道是我加样不够准确还是什么别的原因 荧光定量PCR溶解曲线问题 荧光定量PCR 标准曲线的制作 是不是可以软件自动生成的! 请问：实时荧光定量PCR怎样设定才能有溶解曲线?做实时荧光定量PCR用的是ABI7300型荧光定量PCR仪,实验结果中溶解曲线一栏没有任何曲线,请问是什么原因?是我没有设定溶解曲线的选项吗,要怎 请问,荧光定量PCR中的标准品是每个样本都需要有标准品做标准曲线,还是多个样本有一个就行了?比如我有40个要检测的样本,这标准曲线是做一个,还是40个样本的都要做.可能我没表述清楚。比 做realtime-pcr时,绝对定量标准曲线的制作我第一次做realtime pcr,是做转基因拷贝数的鉴定.我是拿到公司去做,但是公司要求提供做绝对定量标准曲线的标准品,标准品该怎么制备?我查了一些文献, 我就要做荧光定量pcr了,模板已经准备好了,但是之前没有做过,想知道在做荧光定量pcr之前事先做些什么呢?