作业帮请给出芽孢染色法的具体原理及操作,
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/30 20:26:16
请给出芽孢染色法的具体原理及操作,
请给出芽孢染色法的具体原理及操作,
请给出芽孢染色法的具体原理及操作,
一、目的要求
学习并掌握芽孢染色法.
二、基本原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理,用不同染料进行着色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别.芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,因此,当先用一弱碱性染料,如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时,此染料不仅可以进入菌体,而且也可以进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出,若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理,则菌体和芽孢易于区分.
三、器材
枯草芽孢杆菌,蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）,生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；
孔雀绿染液,番红水溶液,苯酚品红溶液,黑色素溶液等.
四、操作步骤
方法1、
（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂片、干燥、固定.
（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上.
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液.加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟.这一步也可不加热,改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟.
（4）倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止.
（5）用番红水溶液复染1分钟,水洗.
（6）待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色.
方法2、
（1）取二支洁净的小试管,分别加入0．2ml无菌水,再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔,另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔,两管各自充分混合成浓厚的菌悬液.
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液,充分混合后,于沸水浴中加热3—5分钟.
（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上,涂薄,风干后,将载玻片稍倾斜于烧杯上,用95％乙醇冲洗至无红色液流出.
（4）再用自来水冲洗,滤纸吸干.
（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处,立即展开涂薄,自然干燥后,油镜观察,在淡紫灰色背景的衬托下,菌体为白色,菌体内的芽孢为红色.
五、实验报告
1．结果
绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同?
2．思考题
为什么在孔雀绿染色液加热染色中,要待玻片冷却后才能用水冲洗?