作业帮测定蛋白质活性的方法有哪些?细胞试验与动物实验的优缺点?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/19 01:22:06
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测定蛋白质活性的方法有哪些?细胞试验与动物实验的优缺点?
测定蛋白质活性的方法有哪些?细胞试验与动物实验的优缺点?
测定蛋白质活性的方法有哪些?细胞试验与动物实验的优缺点?
定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.
凯氏定氮 灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2％ 费时
10小时 将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法） 灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟 多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物 硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸 用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法 较为灵敏 50～100mg 快速 10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶；
Folin－酚试剂法（Lowry法） 灵敏度高 5mg 慢速 40～60分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；
各种硫醇 耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速5～15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；
SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定； 颜色深浅随不同蛋白质变化
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