作业帮花青素含量的测定
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/28 12:08:49
花青素含量的测定
花青素含量的测定
花青素含量的测定
方法1:原花色素的测定方法（分光光度法）
本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子与松树皮提取物）中原花色素含量的测定.
1.方法提要
原花色素（也称缩合单宁）是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物.与其他酚类化合物不同,黄烷醇（缩合单宁,单体,双体等）在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量.
2.仪器
分光光度计.
3.试剂
所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水.
（1）香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级.
（2）提纯的原花色素或儿茶素.
（3）4%香草醛甲醇液.
（4）标准使用液：将提纯的原花色素溶于蒸馏水,制成1mg/mL储备液,将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液.标准使用液应于测定当天配制.
如无提纯的原花色素,可用儿茶素代替,配制方法同上.
4.测定步骤
（1）样品中原花色素的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3,体积比）或者经60%甲醇提取,40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂,水相再经乙醚洗涤后定容.
冰冻干燥的固体原花色素制剂,直接溶于水中（先加少量甲醇助溶）制成原花色素液.
原花色素液于5℃下暗环境中保存备用.
（2）样品测定：用锡箔将试管（14mm×20mm）包裹严,仅留管口用于加样.向管内加入试样0.5mL,再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合,然后加入1.5mL浓盐酸,彻底混匀,室温下显色15min.也可在暗环境下进行以上操作.最后在500nm处比色.
可按以上操作步骤制得标准曲线（即0.1mg原花色素在500nm处的吸收值为0.55）.
5.结果计算
计算原花色素量的公式,
原花色素（1×10-3mg）=A500nm÷0.55×100×V
式中 V——试样稀释体积（倍数）.
6.注释
（1）本方法的检测范围为（5~500）×10-3mg/0.5mL样液.精密度与准确度大于1×10-3mg.
（2）反应试管应用清洁剂浸泡24h,彻底洗涤干净.
（3）进行比色时,用水作空白.
（4）500nm处的OD值应控制在3以下.
（5）试样中原花色素含量较高时,应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值.
（6）显色液应避光放置.
方法2:保健食品中原花青素含量的测定方法
1、原理
原花青素易溶于含羟基的溶剂如甲醇等,本方法是将样品中的前花青素,用甲醇提取,加入盐酸家温水解后将其转化为深红色氰定（C15H10O6·HCL）后进行高压液向色谱测定.
2、试剂：
2.1二氯甲烷 分析纯
2.2甲醇 色谱纯
2.3异丙醇 分析纯
2.4甲酸 分析纯
2.5盐酸 分析纯
3、检验方法
3.1样品 称取约500mg油溶性样品于100ml锥形瓶中,加入5.0ml二氯甲烷,振摇使其溶解.加入45.0ml甲醇,振摇5min后过20μm滤膜.取5.0ml滤液于25ml容量瓶中,加入5.0ml3mol/L盐酸,振摇并用异丙醇定容至刻度.立即过5μm滤膜,取出一部分置于试管中,塞紧瓶塞并在100±5℃烘箱中放置45min进行水解,取出后放置至室温后进行液相色谱分析.
3.2标准 除称取25.0mg标准品于100ml锥形瓶中外,其余步骤均同样品.
3.3定量方法 标准曲线外标法定性定量分析.
4、色谱分析条件
4.1流动相：水：甲醇：异丙醇：甲酸＝73：13：6：8
4.2检测波长：525nm
4.3色谱柱：岛津Shim－Pak CLC ODS 15cm×6mm
4.4柱温：35℃
4.5流速：1ml/min