如何读取双脱氧末端终止法测出的序列?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/24 17:02:39
如何读取双脱氧末端终止法测出的序列?
如何读取双脱氧末端终止法测出的序列?
如何读取双脱氧末端终止法测出的序列?
双脱氧终止法,即sanger测序法,是根据DNA在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,并且在每个碱基后面进行荧光标记,产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列DNA片段,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得可见的DNA碱基序列.
通俗点说,就是通过电泳的方法将一系列DNA片段从小到大排列起来,由于每条片段末尾都含有荧光标记的碱基,通过放射性自显影,即可读出这些碱基的种类,这些碱基的排列顺序,就是待测DNA的序列.
和模板互补结合的引物在DNA聚合酶(通常是DNA聚合酶I的大片段Klenow或T7DNA聚合酶)作用下发生互补链的延伸反应,反应体系中的2’-3’-双脱氧链核苷三磷酸(ddNTP)与底物脱氧核苷三磷酸(dNTP)竞争结合与延伸互补链末端,造成延伸终止。由于产生一系列分别终止于A、G、T、C位置的不同大小的DNA末端,应用高分辨率聚丙烯酰胺凝胶电泳可分辨仅相差一个核苷酸的20-500碱基的DNA片段...
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和模板互补结合的引物在DNA聚合酶(通常是DNA聚合酶I的大片段Klenow或T7DNA聚合酶)作用下发生互补链的延伸反应,反应体系中的2’-3’-双脱氧链核苷三磷酸(ddNTP)与底物脱氧核苷三磷酸(dNTP)竞争结合与延伸互补链末端,造成延伸终止。由于产生一系列分别终止于A、G、T、C位置的不同大小的DNA末端,应用高分辨率聚丙烯酰胺凝胶电泳可分辨仅相差一个核苷酸的20-500碱基的DNA片段,结合放射自显影技术,便可直接读出模板DNA的待测序列。
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