为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/07 02:45:24
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为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入
为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?
我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入等体积的2×SDS上样缓冲液。点15微升。
为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入
很怀疑用超声能不能裂解完全,最好还是买个细胞裂解液吧
SDS-PAGE 跑蛋白质
跑完胶后,转膜,结合一抗、二抗,加荧光底物
进暗室,用胶片显影,才能看到蛋白质条带
在正常光源下,胶和膜上只有marker和溴酚蓝
SDS-PAGE 跑DNA
需要泡到EB里面
然后上紫外光源才能看到DNA条带
在正常光源下,胶上只有marker和溴酚蓝
超声的破胞效果通常不太好,估计可能是细胞没破,或者...
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SDS-PAGE 跑蛋白质
跑完胶后,转膜,结合一抗、二抗,加荧光底物
进暗室,用胶片显影,才能看到蛋白质条带
在正常光源下,胶和膜上只有marker和溴酚蓝
SDS-PAGE 跑DNA
需要泡到EB里面
然后上紫外光源才能看到DNA条带
在正常光源下,胶上只有marker和溴酚蓝
超声的破胞效果通常不太好,估计可能是细胞没破,或者破的太少
你参考下
蛋白质样品的制备
细胞全蛋白质提取(裂解液+超声波)
将处理一细胞培养瓶中的培养基倒入15ml离心管中,用PBS洗涤培养瓶2次后,将PBS与培养基合并,1500rpm离心8min,弃上清,加1ml PBS混匀,转移至1.5ml EP管中,1800rpm离心5min,弃上清,加入20μl裂解液混匀。加入适量(大培养瓶180μl/瓶,中培养瓶90μl/瓶)细胞裂解液至细胞培养瓶中,置于冰上裂解细胞5min,用细胞刮刮下细胞收集于1.5ml EP管中,与培养液中细胞合并,稍离心,冰上裂解,然后95℃水浴 5min,超声破碎5秒,12000rpm离心20min。取上清,即为全蛋白,保存于-20℃。
做完上面这些,提纯后的蛋白质,才能加到点样孔里面
提纯DNA的方法你自己找找吧...
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