要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/09 14:31:16
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要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
细胞按要求培养,抽RNA,反转录为cDNA.
有细胞计数,测RNA 浓度(分光光度计)等环节.
选择反应物,
待测样本:0hr,P4,L4,P12,L12,P24,L24,P36,L36 九种
阴性对照:即无模板对照,NTC
作为标准的样品:如果有必要做标准曲线的话,选择一种比较容易准确定量的DNA (如果是
进行绝对定量分析,则需要浓度完全已知的DNA 标准品——要求:能够被引物所扩增,比
如,其他种类细胞的cDNA,或,克隆有DNA 片段的质粒载体).
选择引物(基因)
endogenous control 使用的持家基因:GAPDH(甘油醛脱氢酶
转录水平待测的基因
因为每个反应管要做3 次重复以上,所以应该准备好充足量的 PCR 试剂,推荐——先混合
得到Master Mix,再分至各个反应管.
※标准曲线和待测样品其实应该在同一次real time PCR 中做.第一次做的话,试验的成分
更多些,所以,重复数应该大一些(4),这样就不得不把标准曲线和待测样品分开了.等到
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
为什么要做real-time pcr 标准曲线
北京哪里能做real time PCR
请问real time PCR实验为什么要使用内参基因?
real-time PCR 标准曲线请问real-time PCR 反应时,是否每一个基因都必须作一个标准曲线?不同的基因能在一块板上跑吗?(是否要考虑到不同的退火温度)为什么?
ABI 7300 real-time PCR 仪器本人做PCR,用的PCR是7300的.在新建文件夹里下拉菜单里有以下选项Allelic discriminationBackgroundDissociationIsothermalPlus/minusPure spectraStandard curve (absolute quantitation)我要用7300做相对
用real time pcr 引物可以做一般pcr 结果电泳的会不会没有意义?
下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好real time pcr检测几个基因的表达量,现在提取rna后做逆转录,买的takara的逆转录试剂盒,不知道应该选随机引物还是o
Real time pcr目的基因Ct值相差1,内参差不多是怎么回事?做了2次都这样,不想是加样的问题
real time PCR需要哪些试剂盒
cDNA是双链么real time PCR为何用cDNA 而不是用直接提取的DNA做
PCR,RT-PCR,GAPDH.real time之间的联系.
RT-PCR和Real time-PCR有什么区别
Real-time PCR和RT PCR有什么区别?
real-time PCR 、quantitative RT-PCR 和absolute quantitative real-time PCR的区别这三种PCR的区别是什么,最好能详细点,第二个是quantitative real-time PCR,再补充一个real-time RT-PCR
real pcr
【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的