要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/05 13:42:17
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
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要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决

要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决
细胞按要求培养,抽RNA,反转录为cDNA.
有细胞计数,测RNA 浓度（分光光度计）等环节.
选择反应物,
待测样本：0hr,P4,L4,P12,L12,P24,L24,P36,L36 九种
阴性对照：即无模板对照,NTC
作为标准的样品：如果有必要做标准曲线的话,选择一种比较容易准确定量的DNA (如果是
进行绝对定量分析,则需要浓度完全已知的DNA 标准品——要求：能够被引物所扩增,比
如,其他种类细胞的cDNA,或,克隆有DNA 片段的质粒载体).
选择引物（基因）
endogenous control 使用的持家基因：GAPDH(甘油醛脱氢酶
转录水平待测的基因
因为每个反应管要做3 次重复以上,所以应该准备好充足量的 PCR 试剂,推荐——先混合
得到Master Mix,再分至各个反应管.
※标准曲线和待测样品其实应该在同一次real time PCR 中做.第一次做的话,试验的成分
更多些,所以,重复数应该大一些（4）,这样就不得不把标准曲线和待测样品分开了.等到

要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决 要做Real-time PCR,都要准备什么?已解决 为什么要做real-time pcr 标准曲线 北京哪里能做real time PCR 请问real time PCR实验为什么要使用内参基因? real-time PCR 标准曲线请问real-time PCR 反应时,是否每一个基因都必须作一个标准曲线?不同的基因能在一块板上跑吗?（是否要考虑到不同的退火温度）为什么? ABI 7300 real-time PCR 仪器本人做PCR,用的PCR是7300的.在新建文件夹里下拉菜单里有以下选项Allelic discriminationBackgroundDissociationIsothermalPlus/minusPure spectraStandard curve (absolute quantitation)我要用7300做相对 用real time pcr 引物可以做一般pcr 结果电泳的会不会没有意义? 下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好real time pcr检测几个基因的表达量,现在提取rna后做逆转录,买的takara的逆转录试剂盒,不知道应该选随机引物还是o Real time pcr目的基因Ct值相差1,内参差不多是怎么回事?做了2次都这样,不想是加样的问题 real time PCR需要哪些试剂盒 cDNA是双链么real time PCR为何用cDNA 而不是用直接提取的DNA做 PCR,RT-PCR,GAPDH.real time之间的联系. RT-PCR和Real time-PCR有什么区别 Real-time PCR和RT PCR有什么区别? real-time PCR 、quantitative RT-PCR 和absolute quantitative real-time PCR的区别这三种PCR的区别是什么,最好能详细点,第二个是quantitative real-time PCR,再补充一个real-time RT-PCR real pcr 【求助】Real-time PCR 引物设计求助通常real-time PCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的target gene 只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的