PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/19 22:38:51
PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
PCR 引物设计,
在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GC rich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GC rich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的参考序列上设计引物就ok咯
巢式扩增
可以,但是要注意一些细节,参见重组PCR
http://www.sciencenet.cn/m/user_content.aspx?id=207346
可以,中间用含20bp左右的相同碱基的引物就可以,overlap-PCR
但没有必要分两段,overlap之后还是比较麻烦的,要按1:1加扩增产物,再连接两片段,通常点突变想回复的时候,或者3000bp以上的时候采用over-lap
GC含量高也没关系,俩引物TM值别差太多就可以,下游引物可以长一点啊,把俩个TM值调到相似...
全部展开
可以,中间用含20bp左右的相同碱基的引物就可以,overlap-PCR
但没有必要分两段,overlap之后还是比较麻烦的,要按1:1加扩增产物,再连接两片段,通常点突变想回复的时候,或者3000bp以上的时候采用over-lap
GC含量高也没关系,俩引物TM值别差太多就可以,下游引物可以长一点啊,把俩个TM值调到相似
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PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
PCR 引物设计,
在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插(包含一定共同片段),这样成吗.
当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GC rich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GC rich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的参考序列上设计引物就ok咯
巢式扩增
可以,但是要注意一些细节,参见重组PCR
http://www.sciencenet.cn/m/user_content.aspx?id=207346
可以,中间用含20bp左右的相同碱基的引物就可以,overlap-PCR
但没有必要分两段,overlap之后还是比较麻烦的,要按1:1加扩增产物,再连接两片段,通常点突变想回复的时候,或者3000bp以上的时候采用over-lap
GC含量高也没关系,俩引物TM值别差太多就可以,下游引物可以长一点啊,把俩个TM值调到相似...
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可以,中间用含20bp左右的相同碱基的引物就可以,overlap-PCR
但没有必要分两段,overlap之后还是比较麻烦的,要按1:1加扩增产物,再连接两片段,通常点突变想回复的时候,或者3000bp以上的时候采用over-lap
GC含量高也没关系,俩引物TM值别差太多就可以,下游引物可以长一点啊,把俩个TM值调到相似
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