用olligo设计引物时出现大小Tm值什么意思

用olligo设计引物时出现大小Tm值什么意思 设计PCR引物时Tm温度有没有具体要求?比如说,Tm必须小于72度,或大于72度? 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度Tm,看哪个? 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 设计PCR引物时 下游引物按互补配对出现 TAG 可以吗? TAG不是终止密码子吗? 假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度, PCR时,如果上下游引物Tm值相差较大该怎样设定反应程序?反应后有非特异性条带出现,只有一条,该怎样去除? 在进行PCR实验扩增时如何设计引物?为什么要用引物?原理是什么? 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kcal/mol这样的引物可用吗? 引物的Tm值是什么 引物设计,用PRIMER 5 设计引物时,有的mRNA设计出来的引物序列,即使最高分的那对,也有二聚体或交叉,该怎么调整,或怎么设计这种mRNA的引物序列. 克隆引物和表达时引物设计的区别 在做PCR时,出现引物二聚体做PCR的时候 用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 设计的引物扩增出两条大小相近的片段怎么办 追问引物设计第一次PCR的产物胶回收后用纯化吗,还是可以直接当做底物?目的基因3‘端GC含量太高,导致上下游引物Tm值差别太大,这样可以用吗?是不是内引物条件可以适当放宽?还有,我用的是p 做PCR时,怎么设计引物?