设计的引物19个碱基,其中包括6 bp的酶切位点和3个保护碱基,和模板配对的只有11个碱基,是不是太短?该引物用于基因.19个碱基的引物是不是肯定不能扩增出目的基因?

设计的引物19个碱基,其中包括6 bp的酶切位点和3个保护碱基,和模板配对的只有11个碱基,是不是太短?该引物用于基因.19个碱基的引物是不是肯定不能扩增出目的基因? overlap引物设计要多少重叠碱基才合适在下小白一只,现在要将一个78bp、1100bp、141bp 3个片段融合起来,最大的片段1100bp在中间.片段之间的引物需要重叠碱基多少个才合适?还想请问,比方说1片段 2个亲本测序后,发现部分位点有6个碱基的插入,如何设计引物进行多态性分析? PCR时引物的概念包括加进去的酶切位点和保护碱基嘛?算进引物的长度吗?一块分析嘛?我设计的下游引物只有15个碱基,但primer5上的长度18个,如果我删去三个就不配对了（只是下游引物）,影响 克隆2500个碱基,该设计多长的引物呢?我准备克隆2500个碱基,引物是不是应该长一点? 引物3 端前几个碱基不配对还能扩出产物吗?我是说在PCR时,引物出现错配到300bp,但它的3端前3个碱基没和300bp处配上.引物也可以在300bp处扩吧?只是扩时是从引物的第4个也就是和模板开始配对的 测序：中间碱基有缺失我在NCBI下载了一段已知基因序列,然后设计引物重复,以外发现有一段缺失,少94个bp,这样后面的编码都打乱了,想请教这种情况, PCR扩增目标基因,完全没有条带.是不是设计的引物太短?引物只有10个碱基和模板配对 引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的 引物长度mer和bp的区别 【Help】所p片段内含有与引物高度相似的片段该如何设计引物PCR我要P一个基因,Forward要带入一段酶切位点（XbaI）,但是基因的头二十多bp的碱基和序列内500多和800多的地方分别有两个高度相似 引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! PCR的引物怎样设计, rt pcr的引物设计 如何进行引物的设计?