作业帮简述PCR的体系组成及各组分在PCR扩增过程中的作用,并简要说明如何通过优化体系的
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/06 23:06:17
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简述PCR的体系组成及各组分在PCR扩增过程中的作用,并简要说明如何通过优化体系的
简述PCR的体系组成及各组分在PCR扩增过程中的作用,并简要说明如何通过优化体系的
简述PCR的体系组成及各组分在PCR扩增过程中的作用,并简要说明如何通过优化体系的
模板的用处就不说了吧
引物：引物首先会与模板配对,然后在酶的催化下从5‘到3’延长
dNTP：合成DNA当然得有原料,这原料就是4中碱基,dNTP就是4种碱基
Mg2+：增加特异性
酶及buffer：催化反应
PCR反应程序：变性,退火,延伸.一般来说,94度变性；退火温度依你的引物而定,延伸时间依你使用的酶及片段大小而定.以Extaq为例,按经验来看,退火温度初次设定在引物理论退火温度再低4度左右,延伸温度为72度,延伸时间按60s/kb来定.
当你扩不出来的时候,可以把退火温度按4度一个梯度进行pcr.
引物首先按加水量加水,再稀释10倍,在20ul的反应体系中,正向反向引物上样量一致,一般为0.2-0.4ul.模板如果用的cDNA,就加1ul,如果以质粒,则首先稀释50倍再加1ul.2mM母液的dNTP加2ul,ExBuffer加2ul,ExTaq加0.1ul,其余用ddH2O补齐至20ul.
做25ul体系，18.3uldH2O，2.5ulBuffer，2ul dNTP，1ul 所扩增样品，0.5ul上游引物，0.5ul下游引物，0.2ulTaq酶。buffer为缓冲液，dNTP为PCR扩增提供各种单个的碱基，上下游引物可以特异的结合在所扩增片段的两端，酶估计你就了解了。希望能帮到你。
简述PCR的体系组成及各组分在PCR扩增过程中的作用,并简要说明如何通过优化体系的
设计一个典型的PCR扩增程序和PCR反应体系.
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