用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒总是只有一条带怎么回事?我用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒,但是酶切后电泳检测总是只有一条带,感觉没有切开,我已经重复酶切多次,而且也用来连接过,事实证明

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/06 07:59:22
用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒总是只有一条带怎么回事?我用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒,但是酶切后电泳检测总是只有一条带,感觉没有切开,我已经重复酶切多次,而且也用来连接过,事实证明
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用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒总是只有一条带怎么回事?
我用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒,但是酶切后电泳检测总是只有一条带,感觉没有切开,我已经重复酶切多次,而且也用来连接过,事实证明确实没有酶切开.但是我反复检查自己的操作都不知道问题出在哪里?我实验室的师兄师姐也没办法了.

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一条带就对了,要是没切开会有好几条带的,双酶切后的小片段太短了,只有大片段的百分之几,所以亮度也只有大片段的百分之几,仪器的灵敏度也是有限的,就像肉眼看不到细菌一样,看不到不表示不存在啊.

嘻嘻,这是个顽固的质粒.

XhoⅠ NdeⅠ相隔的距离是多远呢?如果很小的话,电泳时看不到小带的;如果同时酶切的效果不好,可以先酶切一个,回收DNA,再用第二个酶切,再回收,但要求起始质粒的浓度和量比较高!

NdeI 酶切之前必须用乙醇沉淀法重新纯化DNA,
直接用试剂盒抽提出来的DNA很难切动。

用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒总是只有一条带怎么回事?我用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒,但是酶切后电泳检测总是只有一条带,感觉没有切开,我已经重复酶切多次,而且也用来连接过,事实证明 用Takara的BamH 1和Xho 1做同步双酶切,但是BamH 1的最佳温度是30℃而Xho 1是37℃,这反应温度应该怎么选 含有 NdeⅠ和EcoR Ⅰ酶切位点的复制载体和表达载体 pCAMBIA1301和目的基因质粒,都用Kpn I 和Xho I双酶切,回收后亮度挺好的,为什么连接转化总是不长 pET15b空载用Nde I和BamH I酶切怎么才算切完全? 电机技术参数DE和NDE是什么意思 HindⅢ(173),NdeⅠ(238)这些之中括号内表示什么意思呢? 酶切位点如何选择,我正向引物和反向引物的酶切位点选择的是BamHI,和Xho I,可以吗 在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来 已知基因SCN2B,怎样用primer5设计引物,并添加酶切位点(Xho I-CCTCGAGG需标出),写出引物序列和条件? Real-Time NDE pMD18-T上有Xho I 酶切位点吗? 载体PET32a+与PET30a有什么区别?我用的是PET32a+做载体,但之前他们克隆基因时设计的载体是PET30.现在想知道这两种载体的区别,看看是不是要重新做. 石油机械API标准中NDE是什么意思 电机铭牌中NDE指什么 英语翻译请勿用翻译软体直译~请略懂德文的人帮我将以下德文句子翻译成中文~非常感激!1.Haben Sie etwas gegen beanspruchte Hände?Die Hände sind sehr trocken.2.Man darf in Deutschland nicht einfach Arzneimittel 不用iptg诱导,蛋白会表达吗我做原核表达,载体为pet30a,转到BL21中,没有加入IPTG的菌液和加入IPTG 的菌液跑SDS-PAGE,在预测蛋白大小处均有蛋白表达,不知道什么原因为了确定是否为我的目的蛋白, 英语 (改现在分词和第三人称单数)1.draw 2.listen 3.buy 4.catch 5.watch 6.wash 7.write 8.nde 9.have 10.fly 11.swim 12.get 13.nod