我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/17 20:13:51
![我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时](/uploads/image/z/8487209-65-9.jpg?t=%E6%88%91%E6%98%AF%E7%94%A8cDNA%E4%BD%9C%E6%A8%A1%E6%9D%BF%E7%9A%84%2C%E9%80%80%E7%81%AB53%C2%B0%E7%AC%AC%E4%B8%80%E6%AC%A1%E8%B7%91%E5%87%BA%E6%9D%A5%E4%BA%86%2C%E7%9B%AE%E7%9A%84%E5%9C%A8150%E5%B7%A6%E5%8F%B3%2C%E5%8F%88%E7%B2%97%E5%8F%88%E4%BA%AE%2C%E7%84%B6%E5%90%8E%E7%BA%AF%E5%8C%96%E5%B0%B1%E7%BA%AF%E6%B2%A1%E4%BA%86%2C%E4%BA%8E%E6%98%AF%E5%86%8D%E9%87%8D%E5%A4%8DP%2C%E6%AF%8F%E4%B8%80%E6%AC%A1P%E7%9A%84%E7%BB%93%E6%9E%9C%E9%83%BD%E4%B8%8D%E4%B8%80%E6%A0%B7%2C%E7%9B%AE%E7%9A%84%E6%9D%A1%E5%B8%A6%E6%97%B6%E6%9C%89%E6%97%B6%E6%97%A0%2C%E6%9D%82%E5%B8%A6%E4%B9%9F%E6%98%AF%E6%97%B6%E6%9C%89%E6%97%B6%E6%97%A0%2C%E6%9C%89%E7%9A%84%E6%97%B6%E5%80%99%E6%9D%82%E5%B8%A6%E5%BE%88%E5%A4%9A%2C%E6%9C%89%E7%9A%84%E6%97%B6)
我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时
我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时候P出来什么都没有,请问是什么原因,还有就是,我做的这个,文献中其他物种的退火温度是60,我该怎么办……
我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时
镁离子浓度,引物都正确吧,酶呢?带纹和镁离子浓度有很大关系,查看下原来的实验记录哦.
你说的纯化没有了?是没有切对带吧?考虑150是你的Cdna的值吗?有点小吧,一般在300差点吧?
文献说是60度你用53出来的蛮有可能是非特异性结合出来的。一般来说退火温度和模板没什么大关系,除非模板是GC/AT非常rich的。
纯化纯化没了的话只能说明你起始量太低和纯化时各步骤loose太多。
RT之后的cDNA里边的盐浓度有时候对PCR是个问题,考虑到你pipet时候可能pipet的不均一。
这样情况下,你可以纯化以下cDNA的模板,保证每次PCR的时候盐浓度都是一...
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文献说是60度你用53出来的蛮有可能是非特异性结合出来的。一般来说退火温度和模板没什么大关系,除非模板是GC/AT非常rich的。
纯化纯化没了的话只能说明你起始量太低和纯化时各步骤loose太多。
RT之后的cDNA里边的盐浓度有时候对PCR是个问题,考虑到你pipet时候可能pipet的不均一。
这样情况下,你可以纯化以下cDNA的模板,保证每次PCR的时候盐浓度都是一样的。
还有就是做个control吧,比方说gDNA的。PCR时有时无一般是手上的问题。
收起
纯化过程损失太多了吧